[發明專利]一種替格瑞洛中間體的生物合成方法及其中間體

有效

• 申請號: 201810409842.0
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108689984B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 黃燕鴿;華鵬;游慶紅;張世忠;徐海青;許瑩;袁君
• 申請（專利權）人: 淮陰工學院
• 主分類號: C07D317/44
• 分類號: C07D317/44;C12P17/04
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 孫斌

1.一種替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，先將化合物(2)經氧化反應制得化合物(3)；所述化合物(3)經鄰位二醇保護反應得到化合物(4)；所述化合物(4)與環氧乙烷經加成反應制得化合物(5)；所述化合物(5)經生物轉換作用制得替格瑞洛中間體化合物(1)，其反應式如下所示：

2.根據權利要求1所述的替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，所述化合物(2)經氧化反應制得化合物(3)的氧化反應的溶劑選自無水甲醇、無水乙醇、無水叔丁醇、無水異丙醇、無水仲丁醇、無水THF、無水乙醚、無水甲苯、無水二甲苯、無水二氯甲烷、無水2-甲基四氫呋喃和無水TBME中的一種或幾種，所述氧化反應的反應溫度為20℃～60℃。

3.根據權利要求1所述的替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，所述化合物(3)經鄰位二醇保護反應得到化合物(4)的溶劑為無水丙酮、無水四氫呋喃、無水乙醚、無水甲基叔丁基醚、無水二氯甲烷、無水甲苯、無水叔丁基醚、無水2-甲基四氫呋喃中的一種或幾種，所述保護反應的反應溫度為20℃～60℃。

4.根據權利要求1所述的替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，所述化合物(4)與環氧乙烷經加成反應制得化合物(5)的加成反應的溶劑為無水四氫呋喃、無水乙醚、無水甲基叔丁基醚、無水二氯甲烷、無水甲苯、無水叔丁基醚、無水2-甲基四氫呋喃中的一種或幾種；反應的溫度為0℃～30℃；反應的試劑選自氯化銅，氯化亞銅，溴化銅，溴化亞銅，氯化鋅，三氯化鋁，三氯化鐵，三氟甲烷磺酸鐿，四氯化鈦和氯化銀中的一種或幾種。

5.根據權利要求1所述的替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，所述化合物(5)經生物轉換作用制得替格瑞洛中間體化合物(1)的生物轉換酶為其原始體或者該生物轉換酶的定向突變體；所述生物轉換酶的氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示；所述定向突變體為T68V，N76L，L213E和V302M中的一種或者幾種。

6.根據權利要求1所述的替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，所述化合物(5)經生物轉換作用制得替格瑞洛中間體化合物(1)的反應溶劑選自水/二甲基亞砜 、水/甲醇、水/乙醇、水/異丙醇、水/丙酮、水/二甲基亞砜 /甲醇和水/二甲基亞砜 /丙酮中的一種或者幾種。

7.根據權利要求1所述的替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，所述化合物(5)經生物轉換作用制得替格瑞洛中間體化合物(1)的反應中還包括氨源，所述氨源選自異丙胺、三乙胺、丙胺、乙胺和丁胺中的一種或者幾種，濃度為0.2-1M。

8.根據權利要求1-7任一所述的替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，所述化合物(5)經生物轉換作用制得替格瑞洛中間體化合物(1)的反應中化合物(5)的質量濃度為2-200g/L，反應溫度為22-45℃，反應pH為7.5-8.5。

9.根據權利要求5所述的替格瑞洛中間體的生物合成方法，其特征在于，所述化合物(5)經生物轉換作用制得替格瑞洛中間體化合物(1)的反應中化合物(5)和生物轉換酶的質量濃度比為1:1～70:1。