[發(fā)明專利]一種通過均質(zhì)器高效胎盤間充質(zhì)干細胞的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810408205.1
• 申請日: 2018-04-12
• 公開（公告）號: CN110373381A
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳蓓寧;邢為藩;張鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 陳蓓寧;邢為藩
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種胎盤來源間充質(zhì)干細胞的制備方法，其特征在于：應(yīng)用均質(zhì)器拍打同時酶消化的方法從清洗除菌的胎盤中分離間充質(zhì)干細胞。通過使用均質(zhì)器分離胎盤間充質(zhì)干細胞的效率高傳統(tǒng)方法數(shù)倍，降低酶解時間，提高成功率。所獲得的間充質(zhì)干細胞具有與骨髓及其它間充質(zhì)干細胞相似的特征，有擴增培養(yǎng)和多向分化潛力。

2.權(quán)利要求1中所述的胎盤可以是人自然分娩或剖腹產(chǎn)后廢棄的胎盤，也可以是哺乳動物的胎盤。產(chǎn)婦或動物必須經(jīng)過健康檢查，無遺傳性、感染性疾病，不攜帶致病病原體。胎盤本身必須新鮮，或放血后4℃保存2-8小時，或冷凍保存后仍然具有活力，同時離體后保持清潔無污染。

3.權(quán)利要求1中所述的清洗除菌是指胎盤從短期儲存液中取出后，用PBS類的平衡鹽溶液進行反復(fù)清洗并揉搓擠壓，去除胎盤表面及內(nèi)部的殘余的血水。PBS平衡鹽溶液中添加多種抗生素。抗生素可以是青霉素、鏈霉素、慶大霉素和兩性霉素B。

4.權(quán)利要求1中所述的酶消化法是指應(yīng)用膠原酶I(濃度可以是0.5-1.5％)和DNase I(濃度可以是0.5-1.5％)在37℃水浴鍋中孵育消化。

5.權(quán)利要求1中所述的均質(zhì)器拍打是指在37℃水浴酶解的間隙，通過均質(zhì)器的拍打使組織塊更容易與酶解液充分接觸，促進消化的進行，大大縮短酶解的時間，獲得更多的細胞。

6.權(quán)利要求1中所述的胎盤來源的間充質(zhì)干細胞表面抗原標志CD73、CD90、CD105陽性，CD45、CD146陰性。細胞在相應(yīng)的誘導(dǎo)分化試劑處理后，可以分化成為成骨細胞、成軟骨細胞和成脂肪細胞等多種細胞類型。

7.權(quán)利要求1中所述的胎盤來源的間充質(zhì)干細胞可以通過Ficoll密度梯度離心法得到純化。

8.權(quán)利要求3中所述的儲存液是指胎盤從產(chǎn)房到實驗室暫時保持細胞活性的無菌液體，含有多種營養(yǎng)和抗生素，為含5％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基及青鏈霉素。

9.權(quán)利要求7中所述的Ficoll的密度可以是1.073g/mL。

10.權(quán)利要求1中所述的胎盤來源間充質(zhì)干細胞可以用于細胞治療、基因治療，也可以作為種子細胞用于組織工程。