[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)降解木質(zhì)素菌的降解能力的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810406473.X
• 申請(qǐng)日: 2018-04-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108642122A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 季靜;張悅;王罡;閆豹
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/02
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/02;C12Q1/34;C12R1/38;C12R1/885
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專(zhuān)利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)降解木質(zhì)素菌的降解能力的方法，步驟:將待測(cè)菌分散于無(wú)菌水中，得懸濁液；2)懸濁液涂在滅菌后的羧甲基纖維素鈉固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)；3)取步驟2)獲得的一部分菌，用剛果紅水溶液染色，用NaCl水溶液脫色，觀察是否有透明圈產(chǎn)生；若有透明圈說(shuō)明菌對(duì)木質(zhì)素有降解能力；4)另取有透明圈的步驟2)獲得的菌一部分接種到羧甲基纖維素鈉液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得粗酶液，取粗酶液分別進(jìn)行羧甲基纖維素酶活的測(cè)定和濾紙酶活的測(cè)定；當(dāng)羧甲基纖維素酶活高于2.5U/mL，同時(shí)，濾紙酶活高于1.5U/mL，待測(cè)菌的降解木質(zhì)素菌的降解能力強(qiáng)。本發(fā)明的方法高效、簡(jiǎn)捷、成本低，可用于大規(guī)模檢測(cè)鑒定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)菌領(lǐng)域，涉及一種檢測(cè)降解木質(zhì)素菌的降解能力的方法。

背景技術(shù)

我國(guó)作為一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，每年約有7億多噸農(nóng)作物秸稈。由于其中木質(zhì)素復(fù)雜的理化特性難以利用，最終作為固體廢物被丟棄或被焚燒，焚燒秸稈直接導(dǎo)致空氣中總懸浮顆粒物質(zhì)的增加，并產(chǎn)生二氧化硫、一氧化碳等有毒氣體，對(duì)人體健康產(chǎn)生不良影響。同時(shí)，木質(zhì)素作為木材水解工業(yè)和造紙工業(yè)的副產(chǎn)品而存在，由于缺少環(huán)保的處理方法，成為污染環(huán)境的有害物質(zhì)。而在植物內(nèi)部，由于纖維素受到木質(zhì)素的保護(hù)，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，極難降解。迄今為止，仍有超過(guò)95％的木質(zhì)素以“黑液”直接排入江河或濃縮后燒掉，很少得到有效利用。這些廢液排入江河，將會(huì)嚴(yán)重污染當(dāng)?shù)氐牡乇硭偷叵滤{生活飲用水水源地，給環(huán)境和人類(lèi)健康帶來(lái)嚴(yán)重危害。因此在木質(zhì)纖維素的降解過(guò)程中，加快木質(zhì)素纖維轉(zhuǎn)化為腐殖質(zhì)就成為了關(guān)鍵。木質(zhì)纖維素結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和不規(guī)則性，決定了其生物降解過(guò)程的難度很大。木質(zhì)纖維素的降解是一個(gè)氧化過(guò)程，需要多種酶的協(xié)同作用，其降解酶類(lèi)的合成需由水解碳水化合物提供能量。在木質(zhì)纖維素的生物降解過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生很多酶系，主要的降解酶有：木質(zhì)素過(guò)氧化物酶、錳過(guò)氧化物酶、漆酶和纖維素酶等。

目前，亟需一種檢測(cè)降解木質(zhì)素菌的降解能力的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高效簡(jiǎn)捷、低成本并適合大規(guī)模應(yīng)用的檢測(cè)降解木質(zhì)素菌的降解能力的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：

一種檢測(cè)降解木質(zhì)素菌的降解能力的方法，包括如下步驟:

1)將待測(cè)菌分散于無(wú)菌水中，得懸濁液；

2)取步驟1)獲得的懸濁液涂在滅菌后的羧甲基纖維素鈉固體培養(yǎng)基，于37℃，培養(yǎng)2-3天；

3)取步驟2)獲得的菌的一部分，用1mg/mL的剛果紅水溶液染色，30min后棄去染液，用1mol/L的NaCl水溶液脫色，30min后棄去脫色液，觀察是否有透明圈產(chǎn)生；若有透明圈說(shuō)明菌對(duì)木質(zhì)素有降解能力；

4)另取有透明圈的步驟2)獲得的菌一部分接種到羧甲基纖維素鈉液體培養(yǎng)基中，37℃，120r/min條件下振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)2-3天，得粗酶液，取粗酶液分別進(jìn)行羧甲基纖維素酶活的測(cè)定和濾紙酶活的測(cè)定；當(dāng)羧甲基纖維素酶活高于2.5U/mL，同時(shí)，濾紙酶活高于1.5U/mL，待測(cè)菌的降解木質(zhì)素菌的降解能力強(qiáng)。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明的方法高效簡(jiǎn)捷、時(shí)間短、成本低，測(cè)定的結(jié)果對(duì)各種菌劑在木質(zhì)素降解過(guò)程中的效果有直接的說(shuō)明作用，可用于大規(guī)模檢測(cè)鑒定。

附圖說(shuō)明

圖1為不同菌種CMC酶活力對(duì)比圖。

圖2為不同菌種FPA酶活力對(duì)比圖。

圖3為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。