[發(fā)明專利]一種篩選具有優(yōu)良生長性狀的馬氏珠母貝活體親本的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810404674.6
• 申請(qǐng)日: 2018-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN108715896B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何毛賢;劉文廣;石禹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院南海海洋研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 胡素麗;劉明星

本發(fā)明公開了一種篩選具有優(yōu)良生長性狀的馬氏珠母貝活體親本的方法。本發(fā)明通過馬氏珠母貝性狀關(guān)聯(lián)分析與親本基因型鑒定相結(jié)合的方法，篩選到具有優(yōu)良性狀的馬氏珠母貝活體親本，操作簡便可行，存活率較高，降低了成本，可滿足貝類遺傳育種的需求，篩選到的馬氏珠母貝活體親本可進(jìn)行后續(xù)的繁殖、育種，大大提高選擇效率，從而加快育種進(jìn)程。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于水產(chǎn)遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種篩選具有優(yōu)良生長性狀的馬氏珠母貝活體親本的方法。

背景技術(shù)：

馬氏珠母貝，又稱合浦珠母貝(Pinctada martensii,P.fucata,P.fucatamartensii)，是世界上重要的海水珍珠培育母貝，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在我國的廣東、廣西、海南等沿海有著廣泛分布。在馬氏珠母貝人工養(yǎng)殖過程中，近交、疾病爆發(fā)以及環(huán)境脅迫等都可能導(dǎo)致其性狀退化，通過遺傳改良提高種質(zhì)質(zhì)量已迫在眉睫。目前，采用傳統(tǒng)的育種技術(shù)，如選擇、雜交技術(shù)(Wada and Komaru,1994；He et al,2008；王愛民等，2010；Denget al,2013)改良馬氏珠母貝的生長、珍珠質(zhì)量等已取得了一定成效，育成了我國馬氏珠母貝新品種“海優(yōu)1號(hào)”、“海選1號(hào)”、“南科1號(hào)”和“南珍1號(hào)”。

傳統(tǒng)育種是通過表型間接對(duì)基因型進(jìn)行選擇，這種方法對(duì)質(zhì)量性狀一般是有效的。而對(duì)連續(xù)變異的數(shù)量性狀，由于受多基因控制和易受環(huán)境影響，僅對(duì)表型進(jìn)行選擇，育種周期往往較長、效率較低。要大大提高選擇的效率和可靠性，最理想的方法是能夠直接對(duì)基因型進(jìn)行選擇。即根據(jù)個(gè)體的基因型來選擇親本。在此過程中，需要對(duì)親本的基因型進(jìn)行鑒定，并與測定的生長性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析探尋關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記，然后選擇具有關(guān)聯(lián)分子標(biāo)記的親本來繁育下一代。常規(guī)的做法是：第一步進(jìn)行大量個(gè)體的關(guān)聯(lián)分子標(biāo)記篩選，第二步是活體鑒定親本的基因型。對(duì)于水產(chǎn)魚類等無外殼的動(dòng)物而言，活體取樣問題較容易解決，如采取抽血、剪鰭等，但對(duì)于體表為殼，軟體部位于殼內(nèi)的貝類，如馬氏珠母貝，則是一個(gè)難題；而且，如果分為兩步，需消耗大量的時(shí)間和生物材料。本發(fā)明提供了的方法，將兩步合并為一步，既可進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析又可活體鑒定個(gè)體的基因型，為基因型選擇提供繁育用親本。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種篩選具有優(yōu)良生長性狀的馬氏珠母貝活體親本的方法。該方法可運(yùn)用于馬氏珠母貝的生長關(guān)聯(lián)分子標(biāo)記的篩選和親本基因型的活體鑒定，操作簡便可行，存活率較高，降低了成本，可滿足貝類遺傳育種的需求。本方法也適用于其他易進(jìn)行開口處理的雙殼貝類。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種篩選具有優(yōu)良生長性狀的馬氏珠母貝活體親本的方法，包括以下步驟：

(1)將若干個(gè)馬氏珠母貝外殼上的附著物清洗干凈，平鋪散放、陰干處理；

(2)測量每只馬氏珠母貝的生長性狀，如殼高、殼長、殼寬和重量，按順序編號(hào)排列；

(3)用插核用的開口工具從腹緣輕輕打開馬氏珠母貝貝殼，插入開口栓，開口大小以易于剪取操作為宜，將馬氏珠母貝固定在插核裝置上；馬氏珠母貝的開口處需光線明亮，易于觀察到內(nèi)部結(jié)構(gòu)；

(4)將剪刀和手術(shù)用鑷子用體積分?jǐn)?shù)70％酒精溶液擦洗后，用鑷子從開口處進(jìn)入殼內(nèi)，鉗住鰓，再將剪刀將鉗住的鰓塊剪下，剪取的鰓塊大小不超過0.5cm×0.5cm，取出鰓塊后放在固定液中進(jìn)行固定，用作后續(xù)分析的樣品；剪取每一個(gè)馬氏珠母貝的鰓塊前都用體積分?jǐn)?shù)70％酒精溶液將剪刀和手術(shù)鑷子擦洗干凈，一是消毒，二是避免相互污染；

(5)從馬氏珠母貝中取出開口栓，將馬氏珠母貝按編號(hào)排列，繼續(xù)進(jìn)行養(yǎng)殖；馬氏珠母貝的編號(hào)與所取樣品一一對(duì)應(yīng)；

(6)提取樣品的基因組DNA，對(duì)樣品的分子標(biāo)記進(jìn)行基因型分型，待分析完樣品的基因型后，采用相關(guān)分析軟件分析基因型與生長性狀間的關(guān)聯(lián)性，確定與生長性狀顯著相關(guān)的分子標(biāo)記；