[發(fā)明專利]一種快速檢測(cè)交鏈孢酚和交鏈孢酚單甲醚總量的試紙條

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810402557.6
• 申請(qǐng)日: 2018-04-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108912090B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王蒙;姜冬梅;馮曉元;許文濤;韋迪哲;田曉琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究中心
• 主分類號(hào): C07D311/80
• 分類號(hào): C07D311/80;C07K14/77;C07K1/107;C07K16/14;G01N33/532;G01N33/558
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.交鏈孢毒素半抗原，其特征在于，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示：

2.交鏈孢毒素全抗原，其特征在于，由權(quán)利要求1所述交鏈孢毒素半抗原與載體蛋白偶聯(lián)后得到的；

其中，所述載體蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的交鏈孢毒素全抗原，所述載體蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白。

4.由權(quán)利要求2或3所述交鏈孢毒素全抗原制備的特異性抗體，包括多克隆抗體和單克隆抗體。

5.權(quán)利要求1所述交鏈孢毒素半抗原的制備方法，其特征在于，將交鏈孢酚70mg溶解到DMF 5mL中，加入碳酸鉀47mg和溴丁酸甲酯30mg，加熱到40℃反應(yīng)5h；冷卻，加入10mL水稀釋，用乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相，干燥，減壓蒸去溶劑；然后過(guò)100-200目硅膠柱進(jìn)行分離，以CH₂Cl₂：CH₃OH體積比20：1為洗脫劑，得到中間體Ⅰ，其結(jié)構(gòu)如式(II)所示；將中間體Ⅰ45mg溶解到四氫呋喃-甲醇-水7mL中，加入氫氧化鈉15mg攪拌過(guò)夜；減壓蒸去溶劑，加入5mL水稀釋，鹽酸調(diào)pH為5，過(guò)濾，干燥即得；

其中，四氫呋喃-甲醇-水的體積比為3：3：1；

6.由權(quán)利要求1所述交鏈孢毒素半抗原制備的交鏈孢毒素檢測(cè)試劑或試劑盒，其中所述交鏈孢毒素選自交鏈孢酚、交鏈孢酚單甲醚。

7.由權(quán)利要求2或3所述交鏈孢毒素全抗原制備的交鏈孢毒素檢測(cè)試劑或試劑盒，其中所述交鏈孢毒素選自交鏈孢酚、交鏈孢酚單甲醚。

8.由權(quán)利要求4所述特異性抗體制備的交鏈孢毒素檢測(cè)試劑或試劑盒，其中所述交鏈孢毒素選自交鏈孢酚、交鏈孢酚單甲醚。

9.權(quán)利要求1所述交鏈孢毒素半抗原，或權(quán)利要求2或3所述交鏈孢毒素全抗原，或權(quán)利要求4所述特異性抗體，或權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述檢測(cè)試劑或試劑盒在交鏈孢毒素的免疫分析檢測(cè)中的應(yīng)用，其中所述交鏈孢毒素選自交鏈孢酚、交鏈孢酚單甲醚。

10.權(quán)利要求1所述交鏈孢毒素半抗原，或權(quán)利要求2或3所述交鏈孢毒素全抗原，或權(quán)利要求4所述特異性抗體，或權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述檢測(cè)試劑在制備交鏈孢毒素的膠體金檢測(cè)試紙條中的應(yīng)用，其中所述交鏈孢毒素選自交鏈孢酚、交鏈孢酚單甲醚。

11.一種快速檢測(cè)交鏈孢酚和交鏈孢酚單甲醚總量的試紙條，其特征在于，包括樣品墊、膠體金結(jié)合墊、反應(yīng)膜、吸水墊和底板，所述反應(yīng)膜上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述樣品墊、膠體金結(jié)合墊、反應(yīng)膜和吸水墊依次粘貼在底板上；

其中，所述膠體金結(jié)合墊上包被有交鏈孢毒素特異性抗體-膠體金標(biāo)記物；所述檢測(cè)線包被有權(quán)利要求2或3所述交鏈孢毒素全抗原，所述質(zhì)控線包被有羊抗鼠二抗。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的試紙條，其特征在于，所述交鏈孢毒素特異性抗體-膠體金標(biāo)記物的制備方法如下：用還原劑將氯金酸還原成膠體金納米顆粒；將膠體金與交鏈孢毒素特異性抗體混合孵育30min，加入牛血清白蛋白使其終濃度為1％，反應(yīng)30min后；離心純化、濃縮即得交鏈孢毒素特異性抗體-膠體金標(biāo)記物。

13.利用權(quán)利要求11或12所述試紙條檢測(cè)交鏈孢毒素的方法，其特征在于，將待測(cè)樣品粉碎，向2～10g樣品中加入體積濃度為80％的甲醇水溶液8～50mL，混勻，振蕩提取30min，靜置5～10min，將上清液用水稀釋，使稀釋液中甲醇的終體積濃度為20％～35％，得到待測(cè)樣品溶液；將待測(cè)樣品溶液滴加到所述試紙條的樣品墊上進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色結(jié)果判定。