[發(fā)明專(zhuān)利]基于SPRM技術(shù)進(jìn)行復(fù)用性單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)監(jiān)測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810402477.0
• 申請(qǐng)日: 2018-04-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108693144B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于海霞;韓瑞雪;吳浩;栗大超;徐可欣
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/552
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/552;G01N33/68
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專(zhuān)利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 杜文茹

1.一種基于SPRM技術(shù)進(jìn)行復(fù)用性單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)監(jiān)測(cè)方法，是在特異性單細(xì)胞定點(diǎn)捕捉芯片實(shí)現(xiàn)，其特征在于，包括如下步驟：

1）在第一特異性單細(xì)胞定點(diǎn)捕捉芯片中的單細(xì)胞捕捉位點(diǎn)周?chē)捎脟娔蛴〖夹g(shù)以放射狀點(diǎn)陣形式修飾不同蛋白質(zhì)的特異性識(shí)別抗體；

2）打開(kāi)控制閥，向微管路注入待檢測(cè)細(xì)胞溶液，使待檢測(cè)細(xì)胞在單細(xì)胞捕捉位點(diǎn)處分泌蛋白質(zhì)分別與所述的不同蛋白質(zhì)的特異性識(shí)別抗體結(jié)合，產(chǎn)生不同的SPR響應(yīng)信號(hào)；

3）分別對(duì)比不同點(diǎn)陣位置處的SPR響應(yīng)信號(hào)的強(qiáng)弱，篩選出3-6種SPR響應(yīng)信號(hào)強(qiáng)的待測(cè)細(xì)胞的分泌蛋白標(biāo)志物；

4）根據(jù)篩選出的3-6種待測(cè)細(xì)胞的分泌蛋白標(biāo)志物，在第二特異性單細(xì)胞定點(diǎn)捕捉芯片中的單細(xì)胞捕捉位點(diǎn)周?chē)捎脟娔蛴〖夹g(shù)以扇形結(jié)構(gòu)修飾不同抗體，增大單種蛋白質(zhì)的特異性識(shí)別抗體結(jié)合面積，打開(kāi)控制閥，向微管路注入待檢測(cè)細(xì)胞溶液，用于實(shí)現(xiàn)多種分泌蛋白質(zhì)的原位、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)；

5）采用噴墨打印技術(shù)在第二特異性單細(xì)胞定點(diǎn)捕捉芯片中的扇形結(jié)構(gòu)的兩側(cè)分別修飾條碼形不同蛋白質(zhì)的特異性識(shí)別抗體；

6）打開(kāi)控制閥，采用緩沖液沖洗待測(cè)細(xì)胞所在微管路的特定通道，然后向微管路注入細(xì)胞裂解液，調(diào)整微管路內(nèi)的局限化往返液流，將細(xì)胞裂解后的蛋白質(zhì)均勻分布并吸附固定在條碼形不同蛋白質(zhì)的特異性識(shí)別抗體的表面，對(duì)比不同條碼處的SPR響應(yīng)信號(hào)的強(qiáng)弱，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)部多種蛋白質(zhì)的高靈敏度監(jiān)測(cè)；

所述的第一特異性單細(xì)胞定點(diǎn)捕捉芯片和第二特異性單細(xì)胞定點(diǎn)捕捉芯片為四層結(jié)構(gòu)，在第一特異性單細(xì)胞定點(diǎn)捕捉芯片和第二特異性單細(xì)胞定點(diǎn)捕捉芯片的微管路上在修飾抗體之前，先修飾二維納米復(fù)合結(jié)構(gòu)，用于利用二維納米復(fù)合結(jié)構(gòu)對(duì)蛋白質(zhì)分子的吸附增強(qiáng)效應(yīng)及所激發(fā)的局域表面等離子共振效應(yīng)，提高蛋白質(zhì)分子的吸附固定量及監(jiān)測(cè)靈敏度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于SPRM技術(shù)進(jìn)行復(fù)用性單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)監(jiān)測(cè)方法，其特征在于，步驟1）、步驟4）和步驟5）在采用噴墨打印技術(shù)修飾不同抗體時(shí)，為參考測(cè)量保留無(wú)抗體修飾位點(diǎn)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于SPRM技術(shù)進(jìn)行復(fù)用性單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)監(jiān)測(cè)方法，其特征在于，步驟5）所述的條碼形是指C形或條形或S形。