[發明專利]一種Trop-2特異性嵌合抗原受體細胞制備及其用途

在審

• 申請號: 201810401267.X
• 申請日: 2018-04-28
• 公開（公告）號: CN108440674A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 陳相波;雷鳴;田朋飛
• 申請（專利權）人: 杭州榮澤生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發明公開了一種Trop2特異性嵌合抗原受體，其包括信號肽、抗原結合區、鉸鏈區、跨膜區、共剌激信號傳導區、CD3ζ信號傳導區和T2A短肽，其中信號肽為CSF2RA信號肽、抗原結合區為scFv序列，鉸鏈區為CD8α區，跨膜區為CD28跨膜區的，共刺激信號轉導區為CD28和4?1BB，CD3ζ信號轉導區為CD3分子胞內信號轉導區；上述嵌合抗原受體具體為RZ?28bbZ，其核苷酸編碼序列如SEQ ID No.1所示；本發明還提供一種包含上述核苷酸重組表達載體及其宿主細胞、構建方法、在哺乳動物細胞腫瘤治療中的應用，本發明所述的Trop2特異性嵌合抗原受體可以通過修飾T細胞，使得CAR?T細胞高效特異地治療卵巢癌。

技術領域

本發明涉及免疫細胞制備領域，具體地，本發明涉及一種Trop2特異性嵌合抗原受體及其用途。

技術背景

卵巢癌早期缺乏典型的臨床表現，因此常常進展至晚期階段才被發現，其五年生存率不到30％，是女性生殖系統腫瘤最常見的死因，嚴重威脅著女性的生命安全。目前，卵巢癌治療主要采取手術治療輔以化療的聯合療法，但是超過70％的卵巢癌患者于初次治療后復發，并易對化療產生耐受或抵抗作用，因此，迫切需要探尋新的卵巢癌臨床治療方法。

嵌合抗原受體T細胞(chimeric antigen receptor T cell immullomerapy,CAR-T)技術是基于抗體靶向技術的免疫治療新方法，在血液系統惡性腫瘤治療領域取得的突破性進展初步證實了其治愈腫瘤的潛力，使其成為近年來腫瘤免疫治療領域的熱點。受到CAR-T技術在血液系統惡性腫瘤治療領域成功應用的鼓舞，CAR-T技術在實體瘤治療領域的研究也相繼展開，涉及間皮瘤、神經母細胞瘤、肝癌、胰腺癌、結腸癌等多種腫瘤類型，其中CAR-T技術在治療腦膠質瘤、神經母細胞瘤的研究中取得了顯著的治療效果。

CAR的結構分為主要有胞外抗原結合區(單鏈抗體可變區，single chain Fragmentvariation,scFv)、跨膜區和胞內信號區(共刺激信號和CD3ζ信號)，第一代CAR結構不含有共刺激信號，第二代CAR結構含有一個共刺激信號(如CD28或4-1BB)，第三代CAR結構還有串聯的兩個共刺激信號，第四代CAR分子中包含了如IL2等能改善腫瘤微環境的因子。CD28共刺激信號能更高細胞的增殖效率，4-1BB共刺激信號能夠更好的維持CAR-T細胞的存活時長。CAR-T通過CD19靶點在血液腫瘤中取得突破性進展，部分研究有效率達90％以上，然而CAR-T在實體瘤上還沒有取得突破，所以迫切需要新的腫瘤靶點，新的CAR分子設計以促進實體瘤領域的進展。

CAR-T技術依賴抗體與抗原的特異性結合，使T細胞精準靶向表達目標抗原的腫瘤細胞，因此，合適的靶抗原是CAR-T技術應用的關鍵。理想的靶抗原應該具備在腫瘤組織中高表達而在正常組織中不表達或低表達的特點。人滋養層細胞表面抗原2(humantrophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)是一種由人TACSTD2基因編碼的I型跨膜糖蛋白。研究表明，Trop2是一種腫瘤相關蛋白，與腫瘤細胞的侵襲、轉移及疾病的預后密切相關。Trop2在卵巢癌、胃癌、結腸癌、前列腺、胰腺癌等多種腫瘤細胞中過表達，而在人正常組織中不表達或低表達，在腫瘤的靶向治療中具有潛在的應用價值。因此，本研究選取Trop2作為靶點，制備靶向Trop2的CAR-T細胞并檢測其對Trop2表達陽性的卵巢癌細胞的殺傷作用，為卵巢癌的治療提供新的方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是，提供一種新的通過靶向Trop2的CAR分子，并證明其在實體瘤治療中的潛在應用。具體的說，本發明提供一種Trop2特異性嵌合抗原受體(CAR)，這種CAR分子通過靶向腫瘤細胞表面的Trop2蛋白并激活T細胞下游的信號通路，賦予T細胞殺傷帶有Trop2靶點腫瘤細胞的能力。

為解決上述技術問題，本發明采取的技術方案是：