[發明專利]酪酸梭菌的富集培養基、富集方法、冷凍干燥保護劑及其凍干粉的制備方法

有效

• 申請號: 201810400462.0
• 申請日: 2018-04-28
• 公開（公告）號: CN108504610B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 方佩佩;賈俊濤;孫宇;唐靜;趙麗青;林超;姜英輝;張曉良;黃小華
• 申請（專利權）人: 山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/145
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種酪酸梭菌的富集培養基、富集方法、冷凍干燥保護劑及其凍干粉的制備方法；酪酸梭菌的富集培養基，培養基的組成成分有：脫纖維綿羊血，葡萄糖，胰蛋白胨，酵母粉，牛肉浸膏，無水乙酸鈉，K₂HPO₄，CaCO₃，MgSO₄·7H₂O，半胱胺酸鹽，吐溫?80。本發明還提供一種酪酸梭菌的真空冷凍干燥保護劑，組成成分為：谷氨酸鈉、丙酮酸鈉、低聚果糖、低聚半乳糖、三聚磷酸鈉、脫脂乳粉、蛋白胨、甘油和無菌水。?196℃液氮冷激方式，促進冷激蛋白的產生提高酪酸梭菌在冷藏條件下的存活率，并真空冷凍干燥過程中緩慢提高凍干溫度，本發明提供了一種能夠長時間儲存、方便廣泛應用的酪酸梭菌凍干粉制作技術。

技術領域

本發明涉及一種酪酸梭菌的富集培養基、富集方法、冷凍干燥保護劑及其凍干粉的制備方法，屬于腸道有益菌的增殖及真空冷凍干燥保存技術領域。

背景技術

酪酸梭菌又稱為酪酸梭狀芽孢桿菌、酪酸桿菌、酪酸菌、丁酸梭狀芽孢桿菌、丁酸梭菌、丁酸桿菌、丁酸菌，是一種專性厭氧的革蘭陽性芽孢桿菌。酪酸梭菌能夠促進腸道中乳桿菌及雙歧桿菌的生長，抑制腸出血性大腸埃希菌、痢疾志賀菌、霍亂沙門菌、霍亂弧菌等腸道致病菌的生長繁殖，對加強腸道黏膜營養代謝、保護受損的黏膜屏障、激活免疫細胞、改善并恢復腸道正常免疫力、防治腫瘤的生長等有重要作用。

近年來，腸道微生物菌群對人體及動物健康的重要性引起國內外廣泛關注，酪酸梭菌是被普遍關注認可的腸道益生菌。目前，酪酸梭菌與雙歧桿菌、糞鏈球菌等益生菌已被多家制藥公司研發為微生態制劑，對治療腸道菌群紊亂引起的腸炎、腹瀉、消化不良、腸易激綜合征、結直腸癌新生兒黃疸等疾患有顯著療效。同時，酪酸梭菌克服了雙歧桿菌、乳酸桿菌等微生物制劑制粒過程中生物活性降低、胃酸通過率低等缺陷，逐漸作為微生態飼用添加劑，用于降低幼畜禽死亡率、促進動物生長、提高機體免疫力等。

鑒于酪酸梭菌優良的生理功能，獲得高密度、高穩定性的酪酸梭菌是其發揮效能的關鍵。目前，對酪酸梭菌的研究主要集中于其微生態制劑的效果及作用機理，對酪酸梭菌的富集、保藏技術研究較少。酪酸梭菌作為一種重要的益生菌，將廣泛應用于醫藥、保健食品、動物飼料和植物肥料等行業，如何能富集獲得高密度、高穩定性的酪酸梭菌，這對產品儲存、運輸、應用等都具有重要意義。

為了獲得高密度的酪酸梭菌，其培養基的成分及培養方式是十分重要的，本發明提供一種促進酪酸梭菌增殖的培養基，添加脫纖維綿羊血、各種碳源、氮源、礦物元素為酪酸梭菌的增殖提供豐富營養物質，達到酪酸梭菌富集的目的。

同時在將酪酸梭菌制成凍干粉的過程中會由于冷凍干燥造成部分酪酸梭菌的死亡，因此可以在凍干過程中選擇合適的保護劑，本發明將增殖的酪酸梭菌與含有保護劑的營養乳粉充分混合均勻，使保護劑更好的與菌體結合，達到保護酪酸梭菌的目的。研究表明經過冷激后，微生物會在冷激條件下產生冷激蛋白，這是微生物在惡劣條件下的應激反應，因此本發明將酪酸梭菌在真空冷凍干燥前進行低溫冷激，促進冷激保護蛋白的產生，并通過緩慢提高真空冷凍干燥溫度的方式提高酪酸梭菌在真空冷凍干燥過程中的存活率，提供了一種能夠長時間儲存、方便廣泛應用的高密度酪酸梭菌凍干粉技術。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種酪酸梭菌的增殖培養基達到富集酪酸梭菌的目的，同時提供一種高密度、高穩定性的酪酸梭菌凍干粉。

本發明的基本原理是將富集的酪酸梭菌與特定的營養乳粉溶液均勻混合，增加酪酸梭菌與保護劑的充分結合，增經過冷激的方式促進冷激保護蛋白的產生提高酪酸梭菌在真空冷凍干燥過程中的存活率，得到高密度、高穩定性的酪酸梭菌凍干粉。

本發明提供了一種酪酸梭菌的富集培養基，培養基的組成成分有：脫纖維綿羊血，葡萄糖，胰蛋白胨，酵母粉，牛肉浸膏，無水乙酸鈉，K₂HPO₄，CaCO₃，MgSO₄·7H₂O，半胱胺酸鹽，吐溫-80。