[發(fā)明專利]一種斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的cDNA及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810397763.2
• 申請日: 2018-04-28
• 公開（公告）號: CN108676801B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉曉春;吳茜;唐海培;李水生;蒙子寧;蔡春有;李波;林浩然
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué);海南晨海水產(chǎn)有限公司;陽江職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C12N15/11;C07K14/46;C12Q1/6888
• 代理公司: 廣州知友專利商標(biāo)代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華;劉艷麗

本發(fā)明公開了一種斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。以及該斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的cDNA的制備方法，本發(fā)明還公開了上述斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的編碼蛋白，它的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。本發(fā)明還進一步公開了一種斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的特異性探針及其制備方法，以及該斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的特異性探針在特異性標(biāo)記卵母細(xì)胞以及鑒定卵母細(xì)胞類型中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的cDNA及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

真核生物中只有小部分mRNA經(jīng)過磷酸化，且?guī)в衟oly(A)尾巴；而大部分的mRNA屬于復(fù)制依賴性mRNA，不經(jīng)過磷酸化，沒有poly(A)尾巴，但是這類mRNA的3′端非編碼區(qū)包含一個高度保守的莖環(huán)結(jié)構(gòu)。該結(jié)構(gòu)與一種特異結(jié)合在RNA上的蛋白質(zhì)相互作用，這種蛋白質(zhì)被稱為莖環(huán)結(jié)合蛋白(SLBP或HBP)。前人的研究表明，莖環(huán)結(jié)合蛋白參與mRNA前體的合成、胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖等多種重要過程。SLBP一般有兩種亞型，目前研究比較多的是2型，即SLBP2，編碼SLBP2的基因就是slbp2。

石斑魚屬鱸形目(Perciformes)、鮨科(Serranidae)、石斑魚亞科(Epinephelinae)，石斑魚屬(Epinephelus)。石斑魚肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)豐富，經(jīng)濟價值高，是我國南方沿海主要的海水經(jīng)濟養(yǎng)殖魚類。石斑魚是雌雄同體魚類，其個體發(fā)育過程中先雌后雄，存在性逆轉(zhuǎn)現(xiàn)象。這一現(xiàn)象導(dǎo)致在人工繁殖過程中經(jīng)常會出現(xiàn)雄魚數(shù)量不足的問題，嚴(yán)重制約了石斑魚人工繁殖技術(shù)的規(guī)模化生產(chǎn)和增養(yǎng)殖事業(yè)的發(fā)展。因此，探索石斑魚性逆轉(zhuǎn)的具體機制是很有必要的，信號特異、明顯、可信的性別標(biāo)記基因是研究過程中一項十分有效的工具，石斑魚標(biāo)記基因的開發(fā)對后續(xù)的實驗研究十分重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的cDNA及其制備方法和編碼蛋白。

本發(fā)明的目的還在于提供一種斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的特異性探針及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明的上述第一個目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：一種斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

上述斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的編碼蛋白，它的氨基酸序列如SEQID?NO：2所示。

上述斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的cDNA的制備方法，包括以下步驟：

(1)提取斜帶石斑魚性腺總RNA；

(2)將提取的總RNA用SMART^TM?PCR?cDNA合成試劑盒逆轉(zhuǎn)錄出用于RACE的模板；

(3)設(shè)計兩對特異的上下游引物，通過RACE擴增，獲得斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的cDNA。

步驟(3)中所述的兩對特異性的上下游引物，其中一對特異性的上下游引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO：3～SEQ?ID?NO：4所示，另一對特異性的上下游引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO：5～SEQ?ID?NO：6。

本發(fā)明的上述第二個目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：一種斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的特異性探針，它的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：7所示。

上述斜帶石斑魚的卵母細(xì)胞標(biāo)記基因slbp2的特異性探針的制備方法，包括以下步驟：

(1)提取斜帶石斑魚性腺總RNA；

(2)將提取的總RNA用SMART^TM?PCR?cDNA合成試劑盒逆轉(zhuǎn)錄出用于RACE的模板；