[發明專利]一種細胞劃痕實驗用培養皿及其使用方法

有效

• 申請號: 201810390218.0
• 申請日: 2018-04-27
• 公開（公告）號: CN108384715B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 孔德沛;葉宸;肖廣安;趙檢;陳銳;王超;蔣俊峰;曹哲旭;戴利和;饒希午
• 申請（專利權）人: 上海長海醫院
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/22
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責任公司 31203
• 代理人: 陸林輝

本發明涉及一種細胞劃痕實驗用培養皿及其使用方法，該培養皿包括培養皿本體和圓形蓋裝夾層，所述圓形蓋裝夾層包括倒鉤環、細胞劃痕板和連接所述倒鉤環和所述細胞劃痕板的若干連接桿；所述倒鉤環掛在所述培養皿本體邊緣上；所述細胞劃痕板置于所述培養皿本體中，所述細胞劃痕板由至少一根橫向的玻璃隔板和至少一根縱向的玻璃隔板交叉組成，所述玻璃隔板的兩側面的下部向內傾斜，所述玻璃隔板的底面緊貼所述培養皿本體的底面。使用該培養皿進行細胞劃痕實驗時，可直接用手持的方式安放或移除夾層，避免污染，方便地得到寬度均勻，直線度高的整齊細胞劃痕，可有效提高實驗效率，降低實驗成本，提高實驗數據的準確度。

技術領域

本發明屬于細胞培養技術領域，具體涉及一種細胞劃痕實驗用培養皿及其使用方法。

背景技術

細胞劃痕實驗是一種研究細胞遷移/腫瘤侵襲性的體外試驗方法。其原理是，當細胞長到融合成單層狀態時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域，稱為“劃痕”，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。

細胞劃痕實驗的基本步驟包括“劃痕”的制造、細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數據的處理。其中，劃痕的制造過程是影響實驗結果的關鍵，目前主要方法是通過移液器槍頭垂直于細胞培養皿表面沿直線劃過，使槍尖劃過區域的細胞脫落，從而制造一個無細胞區，稱為“劃痕”。劃痕的寬度取決于槍尖的寬度。劃痕產生后，空白區域兩側細胞會向中間遷移，并逐漸將“劃痕”覆蓋。腫瘤細胞向空白區域遷移的能力反應了其侵襲、轉移的能力，可用空白區域的面積來進行量化測量。細胞的侵襲性越強，劃痕面積縮小得越快。因此，精確測量劃痕面積隨時間變化的趨勢，便可比較不同處理組的細胞侵襲能力的變化，在癌癥發生機制、腫瘤治療等領域具有重要意義。

由于移液器槍頭做工及材料原因，不同槍頭或同一槍頭使用前后，其槍尖寬度變異較大；此外，細胞劃痕寬度處于μm級別，細小的差異便會導致成倍的面積變化，因此操作者使用槍頭劃過培養皿表面的力度與角度可能嚴重影響劃痕的面積；其次，外力劃過形成的劃痕邊緣成鋸齒狀，且難以做到標準的直線，這為面積的計算造成不便，較易產生誤差；再次，在統計劃痕面積的時候，往往需要在顯微鏡下觀察數個時間點，例如，劃痕產生0小時、6小時、12小時、24小時、48小時等，并分別統計每個時間點實驗組與對照組的劃痕面積，嚴格來講，每次數據的采集應當來自同一區域，但是實際操作中，由于顯微鏡下操作不便以及細胞的快速遷移，操作者很難在高度相似的細胞群中準確辨認出上次數據采集的區域；另外，整個劃痕操作都在培養基上方操作，且直接與培養基接觸，放置和取出時極易造成細菌污染。以上諸多因素均可造成較大的實驗誤差，產生錯誤的結論，或導致實驗的可重復性下降。因此，本領域技術人員亟需提供一種保證劃痕直線度高、寬度均一性良好且便于操作的細胞劃痕板。

發明內容

針對現有技術中細胞劃痕直線度和寬度均一性不高的技術問題，本發明的目的在于提供一種可保證劃痕直線度高、寬度均一性良好且便于操作的細胞劃痕實驗用培養皿。

本發明的細胞劃痕實驗用培養皿包括培養皿本體，其特征在于，其還包括圓形蓋裝夾層，所述圓形蓋裝夾層包括倒鉤環、細胞劃痕板和連接所述倒鉤環和所述細胞劃痕板的若干連接桿；

所述倒鉤環掛在所述培養皿本體邊緣上，所述培養皿本體邊緣的外側和/或內側設有卡槽，所述倒鉤環內側壁設有與所述卡槽對應的卡扣；

所述細胞劃痕板置于所述培養皿本體中，所述細胞劃痕板由至少一根橫向的玻璃隔板和至少一根縱向的玻璃隔板交叉組成，所述玻璃隔板的兩側面的下部向內傾斜，即所述玻璃隔板由中部至底面寬度逐漸縮窄而呈錐形，所述玻璃隔板的底面緊貼所述培養皿本體的底面，所述玻璃隔板的底面寬度為400-600μm優選500μm。