[發明專利]一種用于水稻稻曲病病菌LAMP快速檢測的引物組合物及其應用

在審

• 申請號: 201810390016.6
• 申請日: 2018-04-27
• 公開（公告）號: CN108315473A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 陳雨;楊雪;谷春艷;臧昊昱
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院植物保護與農產品質量安全研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 合肥超通知識產權代理事務所(普通合伙) 34136
• 代理人: 龔存云

1.一種用于水稻稻曲病病菌LAMP快速檢測的引物組合物，其特征在于，由一對外引物F3、B3、一對內引物FIP、BIP和一對環引物Loop F、Loop B組成，所述的F3、B3、FIP、BIP、LoopF和Loop B的核苷酸序列分別如下所示：

F3：5'-GCTCCTGGGATTCTTTGGTG-3'；

B3：5'-GCTCGATCGGGACAACCA-3'；

FIP：5'-TTGTCGCGTTGCAAGGACACGGGCATTCGACTCGGAACAG-3'；

BIP：5'-TTCACTGACATGTGCGCTGACCCGGTTTCGTGGAACGGATT-3'；

Loop F：5'-CGATTACCGTGCGTGTTGGA-3’

Loop B：5'-TCCGCAGTTGAAAATATGG-3'。

2.權利要求1所述的LAMP引物組合物在制備水稻稻曲病病菌檢測試劑中的應用。

3.權利要求1所述的LAMP引物組合物在檢測和/或鑒定水稻稻曲病病菌中的應用。

4.一種用于檢測水稻稻曲病病菌的試劑，其特征在于包含權利要求1所述的引物組合物。

5.一種水稻稻曲病病菌LAMP快速檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)提取待檢樣品DNA；

(2)以提取的DNA為模板，利用權利要求1所述的LAMP引物組合物進行LAMP擴增；

(3)LAMP擴增反應結束按照以下任意一種方式觀察結果：

1)向擴增產物中加入顯色劑，輕晃混勻，觀察顏色變化；

2)取擴增產物在2％瓊脂糖凝膠電泳中電泳，觀察擴增結果；

如果LAMP擴增產物顯示黃綠色，電泳圖譜為梯狀條帶，表明含有稻曲病菌菌株；如果擴增產物為橙紅色，電泳圖譜無擴增條帶，表明不含有稻曲病菌菌株。

6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于步驟(2)所述LAMP擴增的反應體系為25μL，由下列濃度體積的組分組成：

用無菌雙蒸水補充擴增體系體積到25μL。

7.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于步驟(2)所述LAMP擴增的反應條件為：65℃保溫60min。

8.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于所述的顯色劑為SYBR Green I。