[發明專利]靶向人源化間皮素的嵌合抗原受體方法和用途

在審

• 申請號: 201810390014.7
• 申請日: 2018-04-27
• 公開（公告）號: CN108715616A
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 劉雅容;金濤
• 申請（專利權）人: 上海恒潤達生生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
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1.一種多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自：

(1)含有依次連接的抗間皮素單鏈抗體的編碼序列、人CD8α鉸鏈區的編碼序列、人CD8跨膜區的編碼序列、人CD28胞內區的編碼序列、人41BB胞內區的編碼序列、人CD3ζ胞內區的編碼序列、任選的EGFR的含胞外結構域III和胞外結構域IV的片段的編碼序列；和

(2)(1)所述多核苷酸序列的互補序列。

2.如權利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，

所述多核苷酸序列在所述抗間皮素單鏈抗體的編碼序列前還含有信號肽的編碼序列，優選地，所述信號肽的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1-63位多核苷酸所示；和/或

所述抗間皮素單鏈抗體的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第64-792位多核苷酸所示；和/或

所述人CD8α鉸鏈區和CD8跨膜區的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第793-999位多核苷酸所示；和/或

所述人CD28胞內區的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1000-1122位多核苷酸所示；和/或

所述人41BB胞內區的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1123-1266位多核苷酸所示；和/或

所述人CD3ζ胞內區的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1267-1599位多核苷酸所示；和/或

所述EGFR的片段含有EGFR的胞外結構域III、胞外結構域IV以及跨膜區，或由EGFR的胞外結構域III、胞外結構域IV以及跨膜區組成；優選地，所述片段含有人EGFR的第310-646位多核苷酸序列，或由人EGFR的第310-646位多核苷酸序列組成；更優選地，所述片段的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1758-2751位多核苷酸所示。

3.一種融合蛋白，所述融合蛋白選自：

(1)含有依次連接的抗間皮素單鏈抗體、人CD8α鉸鏈區、人CD8跨膜區、人CD28胞內區、人41BB胞內區和人CD3ζ胞內區的融合蛋白、任選的EGFR的含胞外結構域III和胞外結構域IV的片段的編碼序列；和

(2)在(1)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且保留活化T細胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；

優選地，所述抗間皮素單克隆抗體為M912。

4.如權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有以下一個或多個特征：

所述融合蛋白在所述抗間皮素單鏈抗體的N端還含有信號肽，優選地，所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-21位氨基酸所示；

所述抗間皮素單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第22-264位氨基酸所示；

所述人CD8α鉸鏈區和CD8跨膜區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第265-333位氨基酸所示；

所述人CD28胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第334-375位氨基酸所示；

所述人41BB胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第376-422位氨基酸所示；

所述人CD3ζ胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第423-533位氨基酸所示；和

所述EGFR的片段含有EGFR的胞外結構域III、胞外結構域IV以及跨膜區，或由EGFR的胞外結構域III、胞外結構域IV以及跨膜區組成；優選地，所述片段含有人EGFR的第310-646位氨基酸序列，或由人EGFR的第310-646位氨基酸序列組成；更優選地，所述片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第582-916位氨基酸所示。

5.一種核酸構建物，所述核酸構建物含有權利要求1-2中任一項所述的多核苷酸序列；

優選地，所述核酸構建物為載體；

更優選地，所述核酸構建物為逆轉錄病毒載體，含有復制起始位點，3’LTR，5’LTR，pis包裝信號，酶切位點，土撥鼠肝炎病毒轉錄后調節元件，以及權利要求1-2中任一項所述的多核苷酸序列。

6.一種逆轉錄病毒，所述逆轉錄病毒含有權利要求5所述的核酸構建物，優選含有所述載體，更優選含有所述逆轉錄病毒載體。