[發明專利]一種用于檢測高血壓用藥相關基因的引物組合物及試劑盒

在審

• 申請號: 201810388078.3
• 申請日: 2018-04-26
• 公開（公告）號: CN108531578A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 田曉麗
• 申請（專利權）人: 寧波美麗人生醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 趙志遠

本發明涉及一種用于檢測高血壓用藥相關基因的引物組合物及試劑盒，引物組合物包括NPPA引物組、ADRB1引物組、CYP2D6引物組、AGTR1引物組、CYP2C9引物組、CYP3A5引物組及GNB3引物組；試劑盒包括上述引物組合物。與現有技術相比，本發明釆用ARMS技術與SYBR染料相結合的方法，得到一種能夠快速、敏感而且簡便地檢測高血壓用藥相關基因(NPPA、ADRB1、CYP2D6、AGTR1、CYP2C9、CYP3A5和GNB3)基因多態性的試劑盒，該試劑盒包括特異性ARMS檢測引物、內控引物及PCR反應液，通過設計ARMS檢測引物并將Scorpions探針替換為SYBR染料，以使檢測成本大大降低，更適合中國患者NPPA、ADRB1、CYP2D6、AGTR1、CYP2C9、CYP3A5和GNB3基因多態性的檢測，具有檢測快速、靈敏度高、特異性強、方法簡單、結果準確的優勢，適于推廣應用。

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，涉及一種用于檢測高血壓用藥相關基因的引物組合物及試劑盒。

背景技術

利尿劑降壓始于1948年，自1957年氯噻嗪(chlorothiazide)問世30多年期間，以氫氯噻嗪(雙氫克尿塞，hydrochlorothiazide)為主的噻嗪類利尿劑一直是抗高血壓藥物的主力軍之一，不論單用或與其他抗高血壓藥物聯用，都有明確的療效。幾十年來國際大規模臨床試驗結果，進一步確定了它在降壓治療中的地位。歐美幾個高血壓處理原則委員會都建議無并發癥的高血壓病人，以利尿劑為首選藥物。近年來，新型利尿劑吲達帕胺(壽比山，indapmide)的上市，使利尿劑在高血壓病的治療地位又有新的提高，它的特點是常用劑量僅表現為輕微的利尿作用，主要表現為血管擴張作用，降壓有效率在80％左右，且不存在傳統利尿劑的代謝異常副作用，已在臨床廣泛應用。心房鈉尿肽前體A(natriureticpeptide precursor A，NPPA)是研究多種疾病遺傳易感性的“候選基因”，位于人染色體1p36.22，由三個外顯子和2個內含子組成，在體內首先合成含151個氨基酸的前ANP原(prepro-ANP)，經過一系列加工得到羧基末端99-126位氨基酸所組成的肽鏈，即ANP，其中17個氨基酸構成的環是其發揮生物活性的必需結構。心房鈉尿肽(ANP)是由心房肌細胞合成和分泌的具有排鈉利尿、擴張血管及抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)作用的物質，編碼其前體物質(NPPA)基因的第3號外顯子上存在T2238C突變，可能通過改變血漿ANP的濃度而影響降壓治療。研究發現，此位點上具有C等位基因的患者服用利尿劑比服用其他種類的降壓藥療效更好，且更有利于減少心腦血管疾病的發生。研究發現，NPPA T2238C基因突變型患者對利尿藥的反應更為敏感治療效果好，而非突變患者對使用鈣離子拮抗藥效果更佳，檢測NPPA基因型有利于患者選擇適合于自己的抗高血壓藥物，防止遠期副反應的發生。對于TT基因型患者，選擇氨氯地平優于其他利尿類以及血管緊張素轉化酶抑制劑。

β受體阻滯劑是能選擇性地與β腎上腺素受體結合、從而拮抗神經遞質和兒茶酚胺對β受體的激動作用的一種藥物類型。腎上腺素受體分布于大部分交感神經節后纖維所支配的效應器細胞膜上，其受體分為3種類型，可激動引起心率和心肌收縮力增加、支氣管擴張、血管舒張、內臟平滑肌松弛和脂肪分解等，這些效應均可被β受體阻滯劑所阻斷和拮抗。人類Beta1腎上腺受體(ADRB1)蛋白是Beta1腎上腺受體阻斷藥的作用靶點，研究發現ADRB1蛋白參與血壓調控，是心臟交感神經腎上腺功能系統信號通路中的主要蛋白。Arg389Gly多態性位于細胞內羧基端，能影響配體介導的腺苷酸環化酶活性以及G蛋白偶聯功能，從而影響心率和血壓。ADRB1基因型的差異可能是ADRB1阻滯劑的降壓療效具有個體差異的原因之一。研究發現，ADRB1基因型為突變雜合子(Gly389Arg)和突變純合子(Arg389Arg)的患者對Beta1受體阻斷藥較為敏感，而基因型為野生純合子(Gly389Gly)對藥物不敏感。