[發明專利]用于檢測硝酸甘油藥物相關基因的引物組合物及試劑盒

在審

• 申請號: 201810388069.4
• 申請日: 2018-04-26
• 公開（公告）號: CN108315408A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 田曉麗
• 申請（專利權）人: 寧波美麗人生醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 趙志遠

本發明涉及用于檢測硝酸甘油藥物相關基因的引物組合物及試劑盒，引物組合物包括ALDH2引物組；試劑盒包括上述引物組合物。與現有技術相比，本發明釆用ARMS技術與SYBR染料相結合的方法，得到一種能夠快速、敏感而且簡便地檢測硝酸甘油藥物療效相關基因(ALDH2)基因多態性的試劑盒，該試劑盒包括特異性ARMS檢測引物、內控引物及PCR反應液，通過設計ARMS引物以及將Scorpions探針換為SYBR染料，以使檢測成本大大降低，更適合中國患者ALDH2基因多態性的檢測，具有檢測快速、靈敏度高、特異性強、方法簡單、結果準確的優勢，適于推廣應用。

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，涉及一種檢測硝酸甘油藥物相關基因的引物組合物及試劑盒。

背景技術

硝酸甘油(Glycery1 Trinitrate，GTN)是治療心絞痛的首選藥物，它能夠直接松弛平滑肌，尤其是血管平滑肌，抑制冠狀動脈的痙攣及擴張局部狹窄，它是第一個用于治療冠心病的硝酸酯類藥物。

乙醛脫氫酶2(ALDH2)是硝酸甘油代謝轉化成一氧化氮過程的關鍵酶，其編碼基因位于染色體上的12q24，該基因存在高度的遺傳多態性。ALDH2可催化硝酸甘油水解生成1,2-二硝酸甘油和亞硝酸鹽，繼而生成NO，發揮舒血管作用。研究發現，ALDH2基因在12號外顯子的504位點有一個G-A的點突變，因為ALDH2基因有兩個等位基因：ALDH2*1和ALDH2*2。ALDH2*1/1基因型(野生型)具有ALDH2的正常活力，ALDH2*1/2基因型(突變型)存在6％的酶活力，而ALDH2*2/2基因型(突變型)則完全喪失該酶活力。

基因突變檢測方法有很多，各國學者對此都進行了大量研究，已經報道的方法包括直接測序法、變性高效液相色譜分析(DHPLC)、PCR-SSCP/RFLP、Scorpions ARMS、TaqManPCR、ME-PCR等。這些方法各有優缺點，在臨床和科研中較為常用的方法為直接測序法以及ARMS(Amplification refractory mutation system，擴增阻滯突變系統)法。

其中，直接測序法能夠發現一些新的未知突變，但檢測能力有限，其檢測靈敏度約20％左右，而且步驟復雜，整個檢測過程涉及PCR-電泳-測序-測序結果的解讀等一系列步驟，費時費力。

ARMS方法是將分子信標(探針)與特異性的ARMS引物相結合創造出來的，ARMS引物3’端設計在突變位點，最后一個堿基與突變堿基配對，釆用無3’→5’外切酶活性的Taq DNA聚合酶，特異性地識別引物的3’末端，只有引物3’末端完全配對時，才能正常擴增，當引物3’末端發生錯配時，不能有效的擴增。當引物與突變模板結合并延伸出相應的產物后，探針兩端的熒光基團和淬滅基團分離而產生熒光。然而，現在市場上的類似試劑盒價格昂貴，應用受到限制。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種用于檢測硝酸甘油藥物相關基因的引物組合物及試劑盒。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

用于檢測硝酸甘油藥物相關基因的引物組合物，該引物組合物包括ALDH2引物組，該ALDH2引物組包括以下引物：

P1-FW：5’-CGGGCTGCAGGCATACACAG-3’；

P1-FS：5’-CGGGCTGCAGGCATACACAA-3’；

P1-R：5’-GTCCTGAACTTCCAGCAG-3’。

進一步地，該引物組合物還包括內控引物組，該內控引物組包括以下引物：

CF：5’-AGCAAGCAGGAGTATGACG-3’；

CR：5’-GAAAGGGTGTAACGCAACT-3’。