[發明專利]一種保持克氏原螯蝦優良性狀的育種方法

在審

• 申請號: 201810385459.6
• 申請日: 2018-04-26
• 公開（公告）號: CN108522383A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 陸超平;馬源潮
• 申請（專利權）人: 海南歸耘田農業科技有限公司
• 主分類號: A01K61/59
• 分類號: A01K61/59;C12Q1/6888;C12Q1/686
• 代理公司: 北京中建聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11004
• 代理人: 劉湘舟

1.一種保持克氏原螯蝦優良性狀的育種方法，其特征是：包括以下選育步驟：

(1)親本的選擇和培育：選擇30個克氏原螯蝦家系，每個家系的個體數為1000-3000尾2-3月齡克氏原螯蝦幼蝦，分別測量體長體重，挑選出具有明顯生長優勢的克氏原螯蝦，每個家系挑選出克氏原螯蝦雌蝦和雄蝦各1尾作為備選親本。選育出雄蝦和雌蝦做好PIT標記，養殖在養殖池內，水溫保持在20-25攝氏度，不間斷充氣，培育期間投喂飼料和魚塊，每天投喂三次，投喂量為20分鐘食盡即可。

(2)建立家系：待克氏原螯蝦性成熟后，利用微衛星標記技術計算被挑選出來的每個雌蝦和雄蝦之間的親緣關系。選擇親緣關系較遠的雌蝦和雄蝦建立20-30個家系進行克氏原螯蝦人工繁殖。

(3)孵化和育苗：將產生的子一代克氏原螯蝦進行人工孵化。每個家系單獨放置在一個養殖池內，同等條件下飼養，水溫保持在20-25攝氏度，不間斷充氣，培育期間投喂飼料和魚塊，每天投喂三次，投喂量為20分鐘食盡即可。

(4)克氏原螯蝦的選育：所有的子一代克氏原螯蝦盡量保證處于相同生活環境，待養殖一年后，測量每個家系所有克氏原螯蝦的體長和體重，挑選出具有明顯生長優勢的克氏原螯蝦，每個家系挑選一條克氏原螯蝦雌蝦和雄蝦作為親本。

(5)重新建立家系：把選擇出的克氏原螯蝦做好重新PIT標記，養殖在環境適宜的養殖池內，水溫保持在20-25攝氏度，不間斷充氣，培育期間投喂飼料和魚塊，每天投喂三次，投喂量為20分鐘食盡即可。待克氏原螯蝦性成熟后，利用微衛星標記技術計算被挑選出來的每個雌蝦和雄蝦之間的親緣關系。選擇親緣關系較遠的雌蝦和雄蝦建立20-30個家系進行克氏原螯蝦人工繁殖。按照上述方法經過3-5代連續選育，即可獲得優良性狀穩定的克氏原螯蝦。

2.根據權利要求1所述的一種保持克氏原螯蝦優良性狀的育種方法，其特征在于：所述的微衛星標記技術所用的10個微衛星引物指標參數如下：

3.根據權利要求1所述的一種保持克氏原螯蝦優良性狀的育種方法，其特征在于：利用微衛星標記技術計算挑選出來的每個雌蝦和雄蝦之間的親緣關系的步驟為：取克氏原螯蝦組織樣品；提取克氏原螯蝦樣品DNA；利用權力要求2所示的微衛星位點對克氏原螯蝦樣品進行PCR擴增；把PCR擴增產物在12％的聚丙烯酰胺膠上進行電泳分離；根據分離結果統計PCR擴增產物的基因型；根據各個個體的基因分型結果利用NTsys軟件計算挑選出來的每個雌蝦和雄蝦之間的親緣關系。

4.根據權利要求3所述的PCR反應體系是15ul：10×PCR Buffer 1.5ul，2.5mmol/LdNTP 0.5ul，MgCl2 1.5ul，上下游引物各0.5ul，Taq酶0.3ul，DNA模板2ul，超純水8.2ul。所述的PCR反應程序為：95℃預變性3min；95℃變性30s，退火溫度復性30s，72℃延伸30s，30個循環；72℃延伸10min；4℃保存。