[發明專利]一種人工熊膽粉及其品質評價方法

在審

• 申請號: 201810384741.2
• 申請日: 2018-04-26
• 公開（公告）號: CN108828086A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 趙淑娟;王崢濤;許盈芃;楊莉;周吉燕;胡之璧;張金家
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;A61K35/57
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供一種人工熊膽粉及其品質評價方法，屬于生物技術領域。該制備工藝簡單可控，制備成品品質合格，原料廉價易得，是通過生物技術手段制備人工熊膽粉的一項突破。

技術領域

本發明涉及一種人工熊膽粉及其品質評價方法。具體說，是采用重組工程菌在發酵罐內進行規模化發酵培養、并純化制備人工熊膽粉的工藝，并對該工藝生產制備的人工熊膽粉進行品質評價，屬于生物技術領域。

背景技術

熊膽粉是熊科動物黑熊或棕熊膽囊的粉末制品，具有清熱、平肝、明目、利膽、解痙、溶石等功效。臨床常用于小兒熱盛驚風、癲癇、抽搐、黃疸；外用治癰腫、痔瘡、目赤云翳等。熊膽粉主要含有膽汁酸，其主要有效成分為牛磺熊去氧膽酸(TUDCA)，中國藥典規定TUDCA含量不低于23％。

目前，國內醫藥市場的熊膽粉主要依靠進口和“活熊取膽”的方法自制。化學合成的方法制備TUDCA因步驟繁瑣成本高且環境污染大未得到廣泛應用。采用生物技術將來源廣泛的家禽膽汁制品生物轉化成與天然熊膽粉的替代資源，既解決熊膽粉資源緊缺，又有利于推動中藥技術現代化進程。

家禽膽汁與熊膽汁在化學組成上的主要差別在于：家禽膽汁不含有TUDCA而是以牛磺鵝去氧膽酸(TCDCA)為主要成分。TUDCA與TCDCA結構上是7位羥基的差向異構體。研究表明，TCDCA可以經過7α-羥基類固醇脫氫酶(7α-HSDH)和7β-羥基類固醇脫氫酶(7β-HSDH)的催化轉變成TUDCA。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于一種人工熊膽粉及其品質評價方法

本發明涉及如下技術方案：

一種人工熊膽粉。

一種人工熊膽粉，其特征在于：TUDCA含量不低于23％，且TUDCA與TCDCA

比例在1～1.5之間，中間產物T-7-KLCA含量低于5％。

一種人工熊膽粉，其特征在于：水分含量低于6％。

一種人工熊膽粉，其特征在于：內毒素的含量低于0.015EU/ml。

一種人工熊膽粉的提取方法：其特征在于：

收集發酵液8000rpm離心20min取上層清液，過D101大孔樹脂，一次上樣量與樹脂等體積，流速控制在成滴下落不連成線，先用H₂O沖至洗脫液無色，再用95％乙醇沖至洗脫液無色并收集該部分洗脫液，50℃減壓旋蒸，濃縮液過0.45μm有機濾膜，濾液水浴揮至浸膏狀，50℃真空干燥箱干燥至恒重，取出搗碎即得人工熊膽粉；

發酵液的來源包括而不限于人工熊膽發酵液。

一種人工熊膽粉的分析方法：其特征在于：

人工熊膽粉含量的監控

對人工熊膽粉的溶液進行采樣，12000rpm離心1.5min，取上清并按1:5的比例加入用水飽和的正丁醇對其進行萃取，混勻分層后，取出上層清液并用氮氣吹干，或是70℃揮干，加入與離心后取的上清液等體積的HPLC級甲醇重新溶解，過0.22μm濾膜；

人工熊膽粉的溶液的來源包括而不限于人工熊膽粉的乙醇溶液、人工熊膽粉的甲醇溶液；

用反向色譜柱Agilent Poroshell 120 EC-C18 column，2.7μm，4.6mm×150mm，使用CAD檢測器，流速為0.6ml/min，進樣量為1μl，柱溫40℃，采集頻率10Hz，霧化溫度45℃，流動相為乙腈和0.3％甲酸的5mmol/L醋酸銨水溶液，進行梯度洗脫；

一種人工熊膽粉的分析方法：其特征在于：

各種膽汁酸含量的監控