[發明專利]一種量子點標記抗體探針試紙條及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810384180.6
• 申請日: 2018-04-26
• 公開（公告）號: CN108717054B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 吳家鍇;吳緒金;汪紅;馬婧瑋;安莉;楊國華;李通;周娟;李萌;馬歡
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 鄭園

1.一種量子點標記抗體探針試紙條的制備方法，其特征在于，步驟為：

（1）量子點標記苯噻菌酯抗體探針的制備：將1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺通過共價偶聯法制備量子點標記苯噻菌酯抗體探針；

（2）樣品墊的處理步驟：用含有2 % w/v牛血清白蛋白、2 %蔗糖、0.1 %疊氮化鈉和2.5% w/v聚乙烯基吡咯烷酮的20 mM pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液浸泡玻璃纖維膜12 h，撈出瀝干，37 ℃烘4 h，烘干后放4 ℃冰箱備用，即得樣品墊和初級結合墊；

（3）結合墊的處理步驟：裁取0.8 cm寬步驟（2）得到的初級結合墊，向初級結合墊上，以5-10 μL/cm的速度噴涂0.1-0.8 μmol/L量子點標記苯噻菌酯抗體探針，自然晾干，即得結合墊；

（4）硝酸纖維素膜的處理步驟：裁取2.5 cm硝酸纖維素膜，在硝酸纖維素膜的近吸水墊端0.6 cm處，用劃膜液點劃0.2 mg/mL的羊抗鼠抗體作為C線，從C線向遠離吸水墊端依次用苯噻菌酯抗原噴涂出T₁、T₂、和T₃線，三者之間間隔0.4 cm，T₁、T₂、和T₃線上苯噻菌酯抗原的濃度為1.68、0.42和0.11 mg/mL，噴涂之后自然晾干即得試紙條硝酸纖維素膜；

（5）吸收墊的處理步驟：裁取1.5 - 2 cm的吸水紙作為吸收墊；

（6）試紙條的組裝：將步驟（4）得到的試紙條硝酸纖維素膜固定于底板居中的位置上，將結合墊一端壓在試紙條硝酸纖維素膜上，重疊0.2 cm，另一端固定在底板上，并與底板平齊；將樣品墊一端壓在結合墊上，重疊0.2 cm，另一端固定于底板上，并與底板平齊；使吸收墊的一端與底板的另一端平齊，吸收墊的另一端壓在試紙條硝酸纖維素膜上，重疊0.2 cm，完成試紙條的組裝；

所述量子點標記抗體探針試紙條，包括底板、硝酸纖維素膜、樣品墊、結合墊以及吸收墊，所述硝酸纖維素膜位于底板上方，硝酸纖維素膜左側的底板上依次設有樣品墊和結合墊、右側的底板上設有吸收墊；所述結合墊上分布有量子點標記抗體探針，硝酸纖維素膜上還分布有苯噻菌酯抗原和羊抗鼠抗體。

2.如權利要求1所述的量子點標記抗體探針試紙條的制備方法，其特征在于：所述底板為寬6 cm的熒光定量用底板，硝酸纖維素膜寬2.5 cm，樣品墊和結合墊寬0.7 - 1.2 cm，吸收墊的寬度為1.5 - 2 cm，樣品墊與結合墊重疊0.2 cm，結合墊硝酸纖維素膜分別重疊0.2cm，吸收墊覆蓋硝酸纖維素膜0.2 cm。

3.如權利要求1所述的量子點標記抗體探針試紙條的制備方法，其特征在于：所述寬度2.5 cm的硝酸纖維素膜上依次設有檢測線簡稱T線，共三條檢測線，依次記為T₃、T₂、T₁線，硝酸纖維素膜上還設有一條控制線簡稱C線，T₃線與結合墊端的距離為0.6 cm，T₃線、T₂線以及T₁線之間的間隔為0.4 cm， T₁線與C線之間的距離為0.5 cm。

4.如權利要求1所述的量子點標記抗體探針試紙條的制備方法，其特征在于：所述T₃、T₂和T₁線上設有苯噻菌酯抗原，苯噻菌酯抗原為苯噻菌酯-牛血清白蛋白復合物，T₃、T₂和T₁線上苯噻菌酯抗原的濃度依次為0.11 mg/mL、0.42 mg/mL、1.68 mg/mL。

5.如權利要求1所述的量子點標記抗體探針試紙條的制備方法，其特征在于：所述C線上設有羊抗鼠抗體，濃度為0.2 mg/mL。