[發明專利]SpyCas9的基因編輯活性抑制位點及其抑制劑在審
| 申請號： | 201810384117.2 | 申請日： | 2018-04-26 |
| 公開（公告）號： | CN108795989A | 公開（公告）日： | 2018-11-13 |
| 發明（設計）人： | 黃志偉 | 申請（專利權）人： | 哈爾濱工業大學 |
| 主分類號： | C12N15/90 | 分類號： | C12N15/90;C12N9/22 |
| 代理公司： | 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382 | 代理人： | 張偉 |
| 地址： | 150080 黑龍江省哈爾濱市*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 活性抑制 位點 基因 抑制劑 核酸酶活性 活性抑制劑 產品提供 制備基因 開發 | ||
1.SpyCas9的基因編輯活性抑制位點，所述活性抑制位點選自SpyCas9中的Glu1108、Ser1109、Ser1216、Lys1200、Arg1335、Arg976和Arg1333中的一個或多個。
2.權利要求1所述的基因編輯活性抑制位點在制備基因編輯相關制劑中的用途。
3.根據權利要求2所述的用途，其特征在于，所述基因編輯相關制劑為SpyCas9的基因編輯/核酸酶活性的活性抑制劑；
優選地，所述基因編輯相關制劑為SpyCas9剪切含PAM基序的dsDNA的活性抑制劑。
4.根據權利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述基因編輯相關制劑結合SpyCas9的PI結構域；
優選地，所述基因編輯相關制劑通過占據SpyCas9的PI結構域中的PAM-DNA相互作用位點而抑制SpyCas9的基因編輯/核酸酶活性。
5.根據權利要求2至4中任一項所述的用途，所述基因編輯相關制劑結合SpyCas9的Glu1108、Ser1109、Ser1216、Lys1200、Arg1335、Arg976和Arg1333中的一個或多個；
優選地，所述基因編輯相關制劑通過模擬PAM而阻斷SpyCas9對dsDNA底物的識別和/或結合。
6.一種能夠抑制SpyCas9的基因編輯/核酸酶活性的抑制劑，所述抑制劑結合SpyCas9的PI結構域；
優選地，所述抑制劑通過占據PI結構域中的PAM-DNA相互作用位點而抑制SpyCas9的基因編輯/核酸酶活性。
7.根據權利要求6所述的抑制劑，其特征在于，所述抑制劑結合SpyCas9的Glu1108、Ser1109、Ser1216、Lys1200、Arg1335、Arg976和Arg1333中的一個或多個。
8.根據權利要求6或7所述的抑制劑，其特征在于，所述抑制劑通過模擬PAM而阻斷SpyCas9對dsDNA底物的識別和/或結合。
9.一種抑制SpyCas9的基因編輯活性的方法，所述方法包括提供權利要求6至8中任一項所述的抑制劑。
10.一種SpyCas9突變體，所述SpyCas9突變體相對于野生型SpyCas9在選自第1108、1109、1216、1200、1335、976和1333中的一個或多個氨基酸位點具有突變；
優選地，所述SpyCas9突變體相對于野生型SpyCas9具有選自以下突變中的一個或多個：S1216T、S1216R、R1333Y、R1333H、R1335Y、S1109R、K1200Y。
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