[發明專利]一種殼聚糖酶細胞表面展示體系及其制備和應用

在審

• 申請號: 201810382811.0
• 申請日: 2018-04-24
• 公開（公告）號: CN108642027A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 李茜茜;劉穎穎;榮紹豐;管世敏;侯永泰;蔡寶國;張碩;時麗
• 申請（專利權）人: 上海應用技術大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/56;C12P19/26;C12P19/14;C12P19/12;C12R1/19
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根

1.一種殼聚糖酶細胞表面展示體系，其特征在于：將編碼殼聚糖酶的基因csn和負責跨膜轉運及錨定功能的冰核蛋白N端結構域的基因inaQN融合得到融合后的基因片段，將融合后的基因片段表達在宿主細胞表面，得到殼聚糖酶細胞表面展示體系；所述的基因csn的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的基因inaQN的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的一種殼聚糖酶細胞表面展示體系，其特征在于：所述編碼殼聚糖酶的基因csn來源于枯草芽孢桿菌，所述宿主細胞為大腸桿菌宿主菌。

3.權利要求1所述的一種殼聚糖酶細胞表面展示體系的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）將SEQ ID NO：1所示的編碼殼聚糖酶的基因csn和SEQ ID NO：2所示的負責跨膜轉運及錨定功能的冰核蛋白N端結構域基因inaQN融合，得到融合后的基因片段；

2）驗證融合后的基因片段的序列；

3）將經驗證的融合后的基因片段插入IPTG誘導型表達質粒中，得到重組的IPTG誘導型表達質粒；

4）將重組的IPTG誘導型表達質粒轉化入宿主菌，使得含有所述重組的IPTG誘導型表達質粒的宿主菌成為所述重組殼聚糖酶細胞表面展示體系；

5）在IPTG誘導下所述重組殼聚糖酶展示在所述宿主菌的表面。

4.根據權利要求3所述的一種殼聚糖酶細胞表面展示體系的制備方法，其特征在于：步驟3)中所述的IPTG誘導型表達質粒是指含有乳糖操縱子的IPTG誘導型表達質粒。

5.根據權利要求3所述的一種殼聚糖酶細胞表面展示體系的制備方法，其特征在于：所述宿主菌為大腸桿菌DH5α、BL21或JM109。

6.根據權利要求3所述的一種殼聚糖酶細胞表面展示體系的制備方法，其特征在于：步驟5)中所述IPTG誘導的具體步驟為：

(I) 將含有所述重組的IPTG誘導型表達質粒的宿主菌接種于培養基中，在28-37℃下震蕩培養10-14h；

(II) 將步驟(I)中的細菌培養物以培養基體積的1-10%接種量轉接于新鮮培養基中，在28-37℃下震蕩培養；

(III) 待步驟(II)中的細菌培養液OD₆₀₀為0.6-0.9時，在培養液中加入IPTG，使IPTG的終濃度在0.2-1.5mM，繼續震蕩培養至培養液OD₆₀₀為1.7-1.9；

(IV) 收集步驟(III)中培養液中的細胞，重懸至磷酸鹽緩沖液中保存于1-4℃即可。

7.權利要求1所述的殼聚糖酶細胞表面展示體系在制備低分子量殼聚糖和殼寡糖中的應用。