[發(fā)明專(zhuān)利]一種藥物化合物高通量篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810381029.7
• 申請(qǐng)日: 2018-04-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108588167B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莊笑梅;張文鵬;張?zhí)旌?/a>;李正;張?jiān)葡?/a>;王娟;相亞楠
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/02
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明涉及藥物篩選技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種藥物化合物高通量篩選方法。本發(fā)明在傳統(tǒng)的藥物高通量活性篩選孵育體系中加入代謝酶源及其輔助反應(yīng)因子，模擬藥物體內(nèi)作用環(huán)境，根據(jù)活性抑制曲線篩選出既具有靶標(biāo)作用的藥效同時(shí)具有代謝穩(wěn)定性較好的藥物化合物，篩選出的化合物具有更高的成藥性，同時(shí)還可能發(fā)現(xiàn)活性代謝產(chǎn)物，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)新的候選化合物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物篩選技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種藥物化合物高通量篩選方法。

背景技術(shù)

創(chuàng)新藥物篩選需要藥物化學(xué)、藥理、藥物代謝、毒理學(xué)以及制劑等多學(xué)科共同配合。當(dāng)前的創(chuàng)新藥物從頭研發(fā)常常是幾個(gè)學(xué)科序貫進(jìn)行，藥物化學(xué)應(yīng)用組合化學(xué)技術(shù)根據(jù)靶標(biāo)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合成大量化合物，藥理學(xué)科應(yīng)用高通量篩選技術(shù)進(jìn)行活性的快速評(píng)價(jià)進(jìn)而篩選出苗頭化合物，藥物代謝及毒理學(xué)應(yīng)用早期藥物代謝和發(fā)現(xiàn)毒理學(xué)技術(shù)平臺(tái)配合進(jìn)行高通量評(píng)價(jià)進(jìn)一步確定出先導(dǎo)化合物，這種模式下雖然促進(jìn)了新藥研發(fā)的速度和成功率，仍存在一些重要問(wèn)題。由于各個(gè)學(xué)科技術(shù)平臺(tái)相對(duì)獨(dú)立，整輪篩選耗時(shí)較長(zhǎng)、需要化合物量較大，存在資源和時(shí)間浪費(fèi)，而在新藥研發(fā)過(guò)程中時(shí)間不僅是金錢(qián)，更重要的是只有更快地為患者提供好藥、解救病痛才是新藥研發(fā)的宗旨。

高通量篩選是當(dāng)前創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的重要模式，但高通量篩選一般僅考慮活性評(píng)價(jià)，即應(yīng)用表達(dá)的酶、受體、離子通道、核酸、以及細(xì)胞等非代謝活性體系作為篩選模型評(píng)價(jià)化合物對(duì)已知靶標(biāo)的結(jié)合、抑制等特異作用，作為藥物篩選的起點(diǎn)，篩選出的化合物雖然具有靶標(biāo)結(jié)合活性，但還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能成為藥物。決定化合物能否成為藥物不僅僅決定于其活性，藥物代謝穩(wěn)定性也至關(guān)重要。代謝穩(wěn)定性可決定藥物生物利用度、半衰期，因此代謝穩(wěn)定性是決定化合物能否成為藥物的重要特征之一。

目前常規(guī)的藥物高通量篩選一般在96-384孔板中將篩選化合物與靶標(biāo)受體、酶等同時(shí)孵育，孵育體系中加入同位素標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，或孵育結(jié)束后應(yīng)用添加熒光染料、熒光報(bào)告蛋白等方法對(duì)化合物與酶結(jié)合物進(jìn)行高通量放射活性或熒光檢測(cè)，快速確定化合物是否具有靶標(biāo)抑制或激活作用來(lái)篩選藥效活性，未考慮藥物在體內(nèi)環(huán)境中都是存在于代謝活性環(huán)境中，因此評(píng)價(jià)出的化合物作為藥物的成功率大打折扣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為克服傳統(tǒng)高通量篩選僅關(guān)注靶標(biāo)活性的問(wèn)題，提供了一種藥物化合物高通量篩選方法，該方法篩選出的化合物具有藥理活性和代謝穩(wěn)定性的雙重優(yōu)勢(shì)，將大大提高藥物高通量篩選的成功率。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明藥物化合物高通量篩選方法，包括以下步驟：

將待篩選的化合物加入高通量篩選用孵育體系中進(jìn)行孵育，所述孵育體系中包括特異性靶標(biāo)受體、肝微粒體或者肝S9，平行設(shè)置加入和不加NADPH反應(yīng)因子的兩組；測(cè)定化合物在不加入NADPH和加入NADPH的孵育體系中孵育后對(duì)靶標(biāo)受體的抑制活性，得到兩條活性抑制曲線；

根據(jù)所述活性抑制曲線判斷待篩選化合物，若兩條活性抑制曲線重合，則化合物的穩(wěn)定性和成藥性好；若相對(duì)于未加入NADPH體系的活性抑制曲線，加NADPH體系的活性抑制曲線右移，則化合物的穩(wěn)定性和成藥性差；若相對(duì)于未加入NADPH體系的活性抑制曲線，加NADPH體系的活性抑制曲線左移，則提示化合物在體內(nèi)可經(jīng)代謝活化成活性代謝物。

優(yōu)選的，所述特異性靶標(biāo)受體為阿片受體或胰高血糖素受體。

優(yōu)選的，所述待篩選化合物經(jīng)系列稀釋后加入孵育體系中孵育。

更優(yōu)選的，所述待篩選化合物在孵育體系中的濃度為10^-12～10^-2mol/L。

優(yōu)選的，所述肝微粒體在孵育體系中的濃度為0.2～0.5mg/ml，所述肝S9在孵育體系中的濃度為0.5～1.0mg/ml，所述NADPH在孵育體系中的濃度為1～2mM。