[發(fā)明專利]一種微白黃鏈霉菌菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810379436.4
• 申請日: 2018-04-25
• 公開（公告）號: CN108715817B
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程代鳳;張曉宇;陸永躍;趙曉峰
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/28;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

本發(fā)明公開了一種微白黃鏈霉菌菌株及其應(yīng)用。該菌株是從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲生態(tài)實驗室飼養(yǎng)的紅火蟻蛹體中分離得到，該菌株保藏編號為GDMCC：60354。該菌株的發(fā)酵液具有較好的抑制稻瘟病菌、香蕉枯萎病菌和荔枝霜疫霉病菌菌絲生長的能力，在黃豆粉培養(yǎng)基培養(yǎng)7天后，所得發(fā)酵液濾液對三種病原菌的抑制率分別達(dá)到73.94％、73.91％和94.53％。抑菌作用還表現(xiàn)有劑量效應(yīng)，即隨著微白黃鏈霉菌DF?5發(fā)酵液濾液劑量的升高，抑菌效果也隨之增強。因此該微白黃鏈霉菌DF?5及其發(fā)酵液濾液可作為抗植物病原真菌類藥物進一步開發(fā)利用，有很大的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種微白黃鏈霉菌菌株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

化學(xué)農(nóng)藥大量使用的今天，給生態(tài)環(huán)境造成了巨大威脅，開發(fā)高效安全綠色環(huán)保新型農(nóng)藥迫在眉睫。微生物農(nóng)藥由于發(fā)酵工藝簡單、成本相對低廉、不易使病蟲害產(chǎn)生抗性、對人畜和環(huán)境溫和而成為開發(fā)新型農(nóng)藥的熱點。在生物長期進化過程中，昆蟲個體和一些微生物形成了共生關(guān)系。其中，昆蟲共生菌為寄主提供防御保護是目前研究最成熟最多的作用之一。在防御共生關(guān)系中，大量研究表明共生菌可以保護其寄主不受病原菌的侵害，比如白蟻的共生細(xì)菌具有氧化還原的能力，能抑制外來病原微生物的入侵。研究表明昆蟲中存在著一些共生菌，尤其是放線菌，對植物病原真菌具有較強的抗菌活性。鏈霉菌是常見的放線菌，其產(chǎn)生的抗生素胞外酶等抗真菌活性物質(zhì)比益生細(xì)菌和真菌產(chǎn)生的活性物質(zhì)種類更多，活性更強。用其孢子或菌絲制成的活細(xì)胞制劑無毒、無害、無殘留，且不傷害非靶標(biāo)微生物，與環(huán)境兼容性好，防病持效期長。易于制成活細(xì)胞制劑如孢子粉劑、種衣劑、菌絲體培養(yǎng)物等，便于生產(chǎn)運輸和保存，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)病蟲害的生物防治。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新的具有抗菌活性、特別是對植物致病菌具有極強抑制活性的微白黃鏈霉菌菌株及其應(yīng)用。

本發(fā)明的第一目的是提供一種新的鏈霉菌即微白黃鏈霉菌(Streptomycesalbidoflavus)DF-5，該菌是從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲生態(tài)實驗室飼養(yǎng)的紅火蟻(Solenopsisinvicta Buren)蛹活體中分離到了一個新菌株，該菌株屬于放線菌。

本發(fā)明的微白黃鏈霉菌(Streptomyces albidoflavus)DF-5的菌學(xué)特性如下：

形態(tài)特征：微白黃鏈霉菌DF-5在高氏1號培養(yǎng)基上培養(yǎng)10d后，菌落表面呈蚌肉白色，有脊?fàn)铖薨櫍型膱A環(huán)，直徑約為0.5cm-1cm，無可溶性色素產(chǎn)生或能產(chǎn)生黃白可溶性色素；基內(nèi)菌絲發(fā)育良好，無橫隔，不斷裂；氣生菌絲生長良好，多分支，孢子絲直或螺旋狀彎曲；孢子成鏈呈松散螺旋狀，分生孢子大小1.5μm×0.45μm，表面光滑。

分子生物學(xué)特性：

16S rDNA序列分析：提取菌DF-5基因組DNA作為模板，以細(xì)菌16S rDNA通用引物27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1492R：TACGGYTACCTTGTTACGACTT對DNA模板進行PCR擴增，PCR產(chǎn)物切膠回收后，用Sanger測序法進行序列測定。測序得到16S rDNA序列如SEQ IDNO.1所示，長度為1490bp。

將所得序列在采用NCBI數(shù)據(jù)庫中比對并下載同源序列，然后使用BLAST、MEGA等軟件建立系統(tǒng)發(fā)育樹(圖1)。將該序列進行Blast比較，表明其與鏈霉菌屬(Streptomycessp.)菌株的同源性最高，相似性大于99％，系統(tǒng)進化樹分析表明菌DF-5與Streptomycesalbidoflavus strain更接近，如圖1所示。結(jié)合菌落形態(tài)學(xué)特征和系統(tǒng)發(fā)育樹分析，明確菌株DF5為微白黃鏈霉菌(Streptomyces albidoflavus)，將其命名為微白黃鏈霉菌(Streptomyces albidoflavus)DF-5。

本發(fā)明的微白黃鏈霉菌(Streptomyces albidoflavus)DF-5菌體及其胞外代謝產(chǎn)物均屬于本發(fā)明的保護范圍。