[發明專利]一種噬菌體雞尾酒及其應用

有效

• 申請號: 201810375733.1
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN108410825B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 韋中;王孝芳;楊可銘;徐陽春;沈其榮
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A01N63/40;A01P1/00;C12R1/92
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

本發明公開了一種噬菌體雞尾酒及其應用，該噬菌體組合物包括以下(1)～(4)中的四株分離自不同地區的青枯菌專性裂解性噬菌體：(1)噬菌體NJ?P3，保藏編號為：CCTCC NO：M 2018099；(2)噬菌體NB?P21，保藏編號為：CCTCC NO：M 2018100；(3)噬菌體NC?P34，保藏編號為：CCTCC NO：M 2018101；(4)噬菌體NN?P42，保藏編號為：CCTCC NO：M 2018102；上述的噬菌體均于2018年3月6日保藏于中國典型培養物保藏中心，分類命名為Podoviridae phage。四株分離自不同地區的青枯菌專性裂解性噬菌體進行組合對青枯病的防治具有顯著的協同增效作用。

技術領域

本發明屬于環境友好型生防制劑，涉及噬菌體雞尾酒(即噬菌體組合物)及其應用，專用于防治土傳青枯病問題。

背景技術

土傳青枯病是由茄科勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一種細菌性病害，目前在我國大部分地區都有發生，南方地區病情較重。目前科學家已從自然環境中分離篩選出大量青枯菌專性噬菌體，并研究它們應用效果和作用機制。由于噬菌體療法大多數只考察了單一噬菌體的效果，而且抑病效果往往不穩定，噬菌體療法還未得到廣泛的認可和大面積推廣。綜合分析發現單一噬菌體療法存在以下局限性：噬菌體具有高度的特異性，宿主范圍窄，所以噬菌體往往只對某一型或幾型的宿主細菌有效，而對其他菌株裂解效果很弱或無治療作用。2)青枯菌基因組中的大質粒攜帶了有助于提高青枯菌致病及適應能力的基因簇或遺傳島。對于單一噬菌體侵染脅迫，青枯菌很容易進化適應形成抗性，甚至會誘導青枯菌致病性增加。3)噬菌體具有“原位適應性”，即噬菌體更容易侵染來自同一塊土壤的細菌，而對來自其他土壤中的細菌感染力相對較弱，這制約噬菌體療法的廣泛的應用。

為提高噬菌體療法在土傳青枯病防控中的應用效果，我們利用分離自不同地區的4株青枯菌專性裂解性噬菌體構建了不同豐富度的噬菌體雞尾酒，探究了噬菌體雞尾酒在盆栽條件下抑制青枯菌入侵番茄根際的能力。

發明內容

針對土傳青枯病病原菌(Ralstonia solanacearum)種間遺傳復雜、變異性強，單一噬菌體制劑防治效果不穩定的問題，提出利用來自環境中具有高效裂解作用的噬菌體構建噬菌體雞尾酒(即噬菌體組合物)的防控方案，探究病原菌響應噬菌體多樣性脅迫的機制，為開發高效穩定的噬菌體制劑提供理論和技術支撐。

本發明的另一目的在于提供上述噬菌體組合物在防治土傳青枯病中的應用。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

一種用于防治土傳青枯病的噬菌體組合物，該噬菌體組合物包括以下(1)～(4)中的四株分離自不同地區的青枯菌專性裂解性噬菌體：

(1)噬菌體NJ-P3，保藏編號為：CCTCC NO：M 2018099，分離自江蘇南京(118°57'E,32°03'N)；

(2)噬菌體NB-P21，保藏編號為：CCTCC NO：M 2018100，分離自浙江寧波 (121°67'E,29°91'N)；

(3)噬菌體NC-P34，保藏編號為：CCTCC NO：M 2018101，分離自江西南昌 (115°51′E,28°41′N)；

(4)噬菌體NN-P42，保藏編號為：CCTCC NO：M 2018102，分離自廣西南寧 (108°21′E,22°49′N)；

上述的噬菌體均于2018年3月6日保藏于中國典型培養物保藏中心(中國武漢，武漢大 學)，分類命名為Podoviridae phage。

作為一種優選技術方案，上述的噬菌體組合物中各噬菌體所占的比例相同。