[發(fā)明專利]核酸合成固相載體、制備方法及含有該載體的核酸合成裝置、核酸合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810372968.5
• 申請(qǐng)日: 2018-04-24
• 公開（公告）號(hào): CN108728431B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭志凌;陳波;朱志強(qiáng);許全貴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門紐克泰生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C03C14/00;C03C4/00;C12M1/42;C12M1/00
• 代理公司: 廈門智慧呈睿知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 35222
• 代理人: 郭福利;魏思凡

本發(fā)明提供一種核酸合成固相載體，其制備方法為：制得水基磁流體，將其加入到含軟磁材料粉末的硅溶膠前驅(qū)體中，靜置至產(chǎn)生凝膠，然后凝膠在600～900℃熱處理1～3h獲得磁控孔玻璃珠MCPG。對(duì)MCPG進(jìn)行活化，可以連接各種核苷酸單體。本發(fā)明還涉及核酸合成裝置，包括上述的MCPG、在殼體內(nèi)嵌設(shè)電磁鐵構(gòu)成的電磁棒以及反應(yīng)板。反應(yīng)棒裝載適量經(jīng)活化的MCPG，然后將反應(yīng)棒插入到反應(yīng)板中各個(gè)反應(yīng)池中，通過控制電磁鐵通斷電實(shí)現(xiàn)MCPG的吸附和釋放，完成核酸片段的合成。該裝置能夠取代現(xiàn)有的塑料合成柱，通過控制磁控孔玻璃珠的用量可以在同一套設(shè)備中實(shí)現(xiàn)從1?50000nmol的核酸合成規(guī)模。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸合成技術(shù)領(lǐng)域，且特別涉及一種核酸合成固相載體、制備方法及含有該載體的核酸合成裝置、核酸合成方法。

背景技術(shù)

核酸片段的人工化學(xué)合成始于50年代初期，1980年，全自動(dòng)的固相核酸合成儀面市后，使得快速、高效合成核酸片段成為可能，這大大地推動(dòng)了生物工程技術(shù)的蓬勃發(fā)展。現(xiàn)有技術(shù)中，DNA通過固相亞磷酰胺三酯法合成：溶液中的采用β-乙腈亞磷酰胺化學(xué)合成核酸片段，核酸鏈的合成時(shí)從3'→5'方向進(jìn)行，通常3'端的第一個(gè)堿基結(jié)合在控孔玻璃珠(Controlled Pore Glass，CPG)上。CPG裝配在兩端有篩板的塑料合成柱中間，通過反應(yīng)液通過合成柱完成一系列脫保護(hù)、縮合、封閉、氧化步驟，循環(huán)操作，最終通過氨解將目標(biāo)核酸序列從CPG上解離下來純化得到成品。

發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，采用現(xiàn)有的塑料合成柱完成核酸合成時(shí)，塑料合成柱的規(guī)格是固定的，在同一設(shè)備上只能實(shí)現(xiàn)固定規(guī)模的核酸片段的合成，例如50nmol、100nmol、200nmol等，合成操作不方便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種核酸合成固相載體，此固相載體為磁控孔玻璃珠，可以替換現(xiàn)有的CPG塑料合成柱，提高制備量的適應(yīng)性，減少試劑的使用和塑料污染的產(chǎn)生。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種核酸合成固相載體的制備方法，制備方法簡(jiǎn)單、易于操作，各項(xiàng)參數(shù)容易控制，適用于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。

本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供含有上述核酸合成固相載體的核酸合成裝置，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，取代現(xiàn)有加液槍和塑料合成柱體系，生產(chǎn)方便。

本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供一種核酸合成方法，取代現(xiàn)有的核酸制備中反應(yīng)、分離、洗滌的方式，合成方便、快捷、成本低、污染少。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。

本發(fā)明提出一種核酸合成固相載體的制備方法，包括以下步驟：

S1，獲取水基磁流體；

S2，將所述水基磁流體加入到含軟磁材料粉末的硅溶膠前驅(qū)體中，靜置至產(chǎn)生凝膠；

S3，將所述凝膠在保護(hù)氣氛下600～900℃熱處理1～3h獲得磁控孔玻璃珠。

本發(fā)明還提出一種核酸合成固相載體，其根據(jù)上述的制備方法制得。

本發(fā)明還提出一種核酸合成裝置，包括：

上述的磁控孔玻璃珠；

電磁棒：包括殼體、嵌設(shè)在所述殼體內(nèi)的電磁鐵，所述電磁鐵連接至外部電源，通電時(shí)所述電磁棒的外壁吸附所述磁控孔玻璃珠，斷電時(shí)釋放所述磁控孔玻璃珠；

反應(yīng)板：具有多個(gè)用于容置試劑的反應(yīng)孔，吸附有磁控孔玻璃珠的所述電磁棒能進(jìn)入所述反應(yīng)孔中使所述磁控孔玻璃珠與所述反應(yīng)孔內(nèi)的試劑反應(yīng)。

本發(fā)明還提出一種核酸合成方法，應(yīng)用上述的核酸合成裝置，且所述磁控孔玻璃珠經(jīng)過活化處理以鏈接核苷，所述電磁棒通電吸附活化的所述磁控孔玻璃珠形成反應(yīng)棒，然后進(jìn)行以下步驟：