[發明專利]一種快速篩查食源性病原菌的方法

在審

• 申請號: 201810372651.1
• 申請日: 2018-04-24
• 公開（公告）號: CN108715883A
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 趙貴明;姬慶龍;陳穎
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）反應體系組成：支持目標菌生長的營養成分、干擾菌抑制劑及細菌特異性酶反應底物；

（2）試劑制備：分為培養液制備和顯色劑制備；

（3）應用方法：根據細菌特異性酶反應特點，底物可在培養前加入或在需要判斷結果時加入；

（4）結果分析：包括實時觀察法和最終結果觀察法。

2.如權利要求1所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的反應體系中支持目標菌生長的營養成分由以下重量份數：蛋白質水解產物5~20份，無機鹽和微量元素0.001~5份，碳水化合物5~15份，促生長因子0.001~1份。

3.如權利要求1或2所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述蛋白質水解產物為蛋白胨、酵母浸粉、牛肉浸粉單一或組合成分。

4.如權利要求1或2所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述促生長因子為調節微生物正常生長代謝所必需的、自身不能合成的有機物，除了維生素外，還包括堿基、嘌呤、嘧啶、生物素和煙酸以及氨基酸營養缺陷突變株所需要的氨基酸。

5.如權利要求1所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的反應體系中干擾菌抑制劑為膽汁提取物、化學抑菌劑、染料抑菌劑和抗生素。

6.如權利要求1所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于所述細菌特異性酶反應底物為一種或多種試鹵靈類底物，包括以下化合物：試鹵靈-β-D-半乳糖苷、試鹵靈-α-D-半乳糖苷、試鹵靈-β-D-葡萄糖苷、試鹵靈-α-D-葡萄糖苷、試鹵靈-β-D-葡萄糖醛酸苷、試鹵靈-β-D-葡萄糖醛酸甲脂、試鹵靈-丁酸、試鹵靈-辛酸脂，其單獨或混合其他熒光底物配成相關顯色劑。

7.如權利要求1所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的試劑制備包括培養液的制備和相應顯色劑的制備：

（1）培養液制備：按照配方將支持目標菌生長的各營養成分和除抗生素以外的干擾菌抑制劑加入去離子水中，攪拌溶解，調節pH值至要求值，121℃高壓滅菌15min，待冷卻至45~55℃，加入相應抗生素，備用；

（2）顯色劑制備：按照配方將細菌特異性酶反應底物溶解到二甲基亞砜或正庚烷中制成顯色劑母液，以過濾法除菌，分裝于無菌的離心管內，每管1mL，備用。

8.如權利要求1所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的應用方法：如果是實時觀察法，每1000mL培養液加入1mL顯色劑，混勻，分裝至無菌帶蓋玻璃瓶或合適容器內，每瓶9mL混合培養液；如果是最終結果觀察法，則直接分裝培養液，每瓶9mL；無菌操作稱取1g(mL)樣品，直接置于分裝的培養液內，在適宜溫度下培養5~8h后，加入10μL顯色劑；每個樣品做3遍，配套制備陰性對照組和陽性對照組。

9.如權利要求1所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的結果分析：使用實時觀察法檢測時，培養一段時間后直接觀察或利用熒光分光光度計，573nm波長激發后，檢測585nm處熒光值；當反應體系變成亮粉色或585nm處有熒光產生時，證明培養物中含有目標菌；可以根據體系顏色變化的時間，估算出樣品中目標菌的數量級，實現半定量。

10.如權利要求1所述的快速篩查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的結果分析：使用最終結果觀察法檢測時，培養一段時間后，向反應體系中滴加10μL顯色劑后，混勻觀察或利用熒光分光光度計，573nm波長激發后，檢測585nm處熒光值；當反應體系在5min內變成亮粉色或585nm處有熒光產生時，證明培養物中含有目標菌。