[發(fā)明專利]一種小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810370744.0
• 申請(qǐng)日: 2018-04-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108575983A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王軍;劉健華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N1/00
• 分類號(hào): A01N1/00;G09B23/36
• 代理公司: 深圳市恒申知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44312
• 代理人: 袁文英

1.一種小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、制備灌注插管；

S2、配制血管造影劑與包埋劑；

S3、根據(jù)動(dòng)物樣本的體型制作包埋盒；

S4、準(zhǔn)備與配制麻醉劑以及配制脫毛劑；

S5、利用所述麻醉劑對(duì)動(dòng)物樣本進(jìn)行麻醉；

S6、利用所述灌注插管對(duì)動(dòng)物樣本進(jìn)行血管灌注；

S7、利用脫毛劑對(duì)動(dòng)物樣本進(jìn)行脫毛處理；

S8、將脫毛后的動(dòng)物樣本放在蓋有紗布的托盤(pán)上，按照動(dòng)物樣本的生活特征常規(guī)將動(dòng)物樣本臥姿擺放后，將裝載有該動(dòng)物樣本的托盤(pán)移入冷柜中進(jìn)行低溫冷凍后，作固定包埋；

S9、將所述包埋盒放入冷柜中，加入所述包埋劑至包埋盒中，并覆蓋所述包埋盒的底部，然后關(guān)上冷柜進(jìn)行冷凍處理，待所述包埋盒凍結(jié)成平滑的底層后，將上述冷凍好的動(dòng)物樣本放入到所述包埋盒里，并保持動(dòng)物樣本身體長(zhǎng)軸方向垂直于底層，再加入所述包埋劑至覆蓋動(dòng)物樣本后進(jìn)行冷凍，使動(dòng)物樣本固定在所述包埋盒里；

S10、冷凍包埋后的動(dòng)物樣本經(jīng)過(guò)不同斷層間距切削成若干斷層切片。

2.如權(quán)利要求1所述的小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述S1中：按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣本的大小及解剖結(jié)構(gòu)特征，購(gòu)買(mǎi)各種型號(hào)注射用的一次性注射針頭和靜脈針，將所述注射針頭的針?biāo)舫粝箩樄２?，用?xì)砂紙將所述注射針頭磨平磨光，剪去所述靜脈針的針頭，用塑料軟管部接上所述注塑針頭，細(xì)線結(jié)扎固定，完成灌注插管的制備。

3.如權(quán)利要求1所述的小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述步驟S2中，所述血管造影劑的配制過(guò)程包括如下步驟：根據(jù)動(dòng)物樣本大小，按比例配制出濃度為8％～20％明膠溶液，然后加人氧化鋁或朱砂，充分拌勻后待用，并使明膠溶液的溫度保持在35℃～45℃之間；

所述包埋劑的配制過(guò)程包括如下步驟：按3％～5％的濃度稱取適量明膠，溶解過(guò)濾明膠，然后加入亞甲基藍(lán)試劑1g/1000ml，攪拌均勻，配成所述包埋劑。

4.如權(quán)利要求1所述的小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述步驟S3中：按照實(shí)驗(yàn)要求確定臥式切削，測(cè)量動(dòng)物樣本的長(zhǎng)寬高，選用有機(jī)玻璃為制作原材料；按照比例制作出一底座和五面可拆卸的有機(jī)玻璃活動(dòng)板，經(jīng)螺絲組裝固定成呈長(zhǎng)方型的盒子，在盒子內(nèi)沿長(zhǎng)度方向設(shè)置四個(gè)均勻分布的定位桿，以形成所述包埋盒。

5.如權(quán)利要求1所述的小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述S4中，準(zhǔn)備的麻醉劑為乙醚試劑，制備的麻醉劑為20g烏拉坦、5g水合氯醛晶體和100ml超純凈水混合制成混合麻醉液。

6.如權(quán)利要求5所述的小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法，其特征在于，當(dāng)選用所述乙醚試劑對(duì)動(dòng)物樣本麻醉時(shí)，利用所述乙醚試劑對(duì)動(dòng)物樣本進(jìn)行吸入麻醉，并將動(dòng)物樣本放入裝有乙醚棉球的密封容器中，待麻醉后，取出仰臥固定于灌注平臺(tái)上；當(dāng)選用所述混合麻醉液對(duì)動(dòng)物樣本麻醉時(shí)，用注射器抽取混合麻醉液，隨即對(duì)動(dòng)物樣本進(jìn)行腹腔注射，待麻醉后將動(dòng)物仰臥固定于灌注平臺(tái)上，準(zhǔn)備灌注。

7.如權(quán)利要求1所述的小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述S4中，所述脫毛劑的配制包括如下兩種溶液：(1)取6～10g硫化鈉晶體，加入到裝有100ml超純凈水的燒杯中，配制成濃度為6％～10％的硫化鈉溶液；(2)取15～20g的氫氧化鈉晶體，配制濃度為15％～20％的氫氧化鈉溶液。

8.如權(quán)利要求1所述的小型動(dòng)物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述S6中，在動(dòng)物樣本麻醉后，于動(dòng)物樣本腹股溝部找到動(dòng)脈搏動(dòng)處，作1～2cm的矢狀切口，鈍性分離出股動(dòng)脈和股靜脈，按照血管大小，選擇相適應(yīng)的所述灌注插管，作動(dòng)脈、靜脈雙向插管并結(jié)扎固定，然后注射肝素鈉抗凝，待2～3分鐘后放血處死，灌注相應(yīng)的所述血管造影劑后，拔掉所述灌注插管，并結(jié)扎血管，防止所述血管造影劑滲漏，清理干凈動(dòng)物樣本的切口及局部結(jié)構(gòu)，作縫合處理。