[發明專利]一種小型動物切削冷凍包埋方法

在審

• 申請號: 201810370744.0
• 申請日: 2018-04-24
• 公開（公告）號: CN108575983A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 王軍;劉健華
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: A01N1/00
• 分類號: A01N1/00;G09B23/36
• 代理公司: 深圳市恒申知識產權事務所(普通合伙) 44312
• 代理人: 袁文英

1.一種小型動物切削冷凍包埋方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、制備灌注插管；

S2、配制血管造影劑與包埋劑；

S3、根據動物樣本的體型制作包埋盒；

S4、準備與配制麻醉劑以及配制脫毛劑；

S5、利用所述麻醉劑對動物樣本進行麻醉；

S6、利用所述灌注插管對動物樣本進行血管灌注；

S7、利用脫毛劑對動物樣本進行脫毛處理；

S8、將脫毛后的動物樣本放在蓋有紗布的托盤上，按照動物樣本的生活特征常規將動物樣本臥姿擺放后，將裝載有該動物樣本的托盤移入冷柜中進行低溫冷凍后，作固定包埋；

S9、將所述包埋盒放入冷柜中，加入所述包埋劑至包埋盒中，并覆蓋所述包埋盒的底部，然后關上冷柜進行冷凍處理，待所述包埋盒凍結成平滑的底層后，將上述冷凍好的動物樣本放入到所述包埋盒里，并保持動物樣本身體長軸方向垂直于底層，再加入所述包埋劑至覆蓋動物樣本后進行冷凍，使動物樣本固定在所述包埋盒里；

S10、冷凍包埋后的動物樣本經過不同斷層間距切削成若干斷層切片。

2.如權利要求1所述的小型動物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述S1中：按照實驗動物樣本的大小及解剖結構特征，購買各種型號注射用的一次性注射針頭和靜脈針，將所述注射針頭的針栓剪除，留下針梗部，用細砂紙將所述注射針頭磨平磨光，剪去所述靜脈針的針頭，用塑料軟管部接上所述注塑針頭，細線結扎固定，完成灌注插管的制備。

3.如權利要求1所述的小型動物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述步驟S2中，所述血管造影劑的配制過程包括如下步驟：根據動物樣本大小，按比例配制出濃度為8％～20％明膠溶液，然后加人氧化鋁或朱砂，充分拌勻后待用，并使明膠溶液的溫度保持在35℃～45℃之間；

所述包埋劑的配制過程包括如下步驟：按3％～5％的濃度稱取適量明膠，溶解過濾明膠，然后加入亞甲基藍試劑1g/1000ml，攪拌均勻，配成所述包埋劑。

4.如權利要求1所述的小型動物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述步驟S3中：按照實驗要求確定臥式切削，測量動物樣本的長寬高，選用有機玻璃為制作原材料；按照比例制作出一底座和五面可拆卸的有機玻璃活動板，經螺絲組裝固定成呈長方型的盒子，在盒子內沿長度方向設置四個均勻分布的定位桿，以形成所述包埋盒。

5.如權利要求1所述的小型動物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述S4中，準備的麻醉劑為乙醚試劑，制備的麻醉劑為20g烏拉坦、5g水合氯醛晶體和100ml超純凈水混合制成混合麻醉液。

6.如權利要求5所述的小型動物切削冷凍包埋方法，其特征在于，當選用所述乙醚試劑對動物樣本麻醉時，利用所述乙醚試劑對動物樣本進行吸入麻醉，并將動物樣本放入裝有乙醚棉球的密封容器中，待麻醉后，取出仰臥固定于灌注平臺上；當選用所述混合麻醉液對動物樣本麻醉時，用注射器抽取混合麻醉液，隨即對動物樣本進行腹腔注射，待麻醉后將動物仰臥固定于灌注平臺上，準備灌注。

7.如權利要求1所述的小型動物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述S4中，所述脫毛劑的配制包括如下兩種溶液：(1)取6～10g硫化鈉晶體，加入到裝有100ml超純凈水的燒杯中，配制成濃度為6％～10％的硫化鈉溶液；(2)取15～20g的氫氧化鈉晶體，配制濃度為15％～20％的氫氧化鈉溶液。

8.如權利要求1所述的小型動物切削冷凍包埋方法，其特征在于，在所述S6中，在動物樣本麻醉后，于動物樣本腹股溝部找到動脈搏動處，作1～2cm的矢狀切口，鈍性分離出股動脈和股靜脈，按照血管大小，選擇相適應的所述灌注插管，作動脈、靜脈雙向插管并結扎固定，然后注射肝素鈉抗凝，待2～3分鐘后放血處死，灌注相應的所述血管造影劑后，拔掉所述灌注插管，并結扎血管，防止所述血管造影劑滲漏，清理干凈動物樣本的切口及局部結構，作縫合處理。