[發明專利]一種殼聚糖或殼聚糖鹽中蛋白質含量的測定方法

有效

• 申請號: 201810369311.3
• 申請日: 2018-04-23
• 公開（公告）號: CN108956488B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 劉斌;施燕平;秦洋;張曉漫
• 申請（專利權）人: 山東省醫療器械產品質量檢驗中心
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 濟南竹森知識產權代理事務所(普通合伙) 37270
• 代理人: 朱家富

1.一種殼聚糖或殼聚糖鹽中蛋白質含量的測定方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將庫馬斯亮藍溶解于體積百分比濃度為95％的乙醇溶液中，加入濃鹽酸，庫馬斯亮藍G-250與濃鹽酸的質量體積比為2:1，單位為mg/ml，蒸餾水稀釋至庫馬斯亮藍濃度為100mg/L，鹽酸質量百分比終濃度為1.85％，制得庫馬斯亮藍G-250試液；

(2)稱取103～107℃干燥至恒重的殼聚糖或殼聚糖鹽樣品，溶解于質量百分比濃度為1％的醋酸溶液中，混合均勻，超聲波處理15min，然后沸水浴中處理25～35min，制得濃度為5mg/ml的樣品溶液；

(3)配制不同濃度的蛋白質標準溶液，加入步驟(1)制得庫馬斯亮藍G-250試液，測定595nm處各標準溶液的吸光度，繪制吸光度---濃度曲線；

(4)向步驟(2)制得的樣品溶液中加入步驟(1)制得庫馬斯亮藍G-250試液，測定樣品溶液在595nm處的吸光度，計算樣品中蛋白質含量。

2.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述步驟(2)中，超聲波處理條件為：溫度20～24℃，頻率35～45kHz，功率為400～500W。

3.如權利要求2所述的測定方法，其特征在于，所述步驟(2)中，超聲波處理條件為：溫度22℃，頻率40kHz，功率為500W。

4.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述步驟(3)中，不同濃度的蛋白質標準溶液采用如下步驟配制：

(i)精確吸取5％牛血清白蛋白標準液0.6mL，蒸餾水稀釋定容至1000mL，制得濃度為30μg/mL的蛋白質標準溶液；

(ii)分別取步驟(i)配制的濃度為30μg/mL的蛋白質標準溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.0ml，然后分別加入質量百分比濃度為1％的醋酸溶液1.0ml、0.9ml、0.8ml、0.6ml、0.2ml、0ml，制得蛋白質濃度為0ug/mL、3ug/mL、6ug/mL、12ug/mL、24ug/mL、30ug/mL的蛋白質標準溶液。

5.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述步驟(4)中，庫馬斯亮藍G-250試液的添加量為每毫升蛋白質樣品溶液添加5ml庫馬斯亮藍G-250試液。

6.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述步驟(4)中，計算樣品中蛋白質含量的步驟如下：

將測定樣品溶液在595nm處的吸光度值代入步驟(3)中的吸光度---濃度曲線，計算獲得樣品蛋白質濃度ρ₂，代入下式，計算獲得樣品中蛋白質含量ρ₃；

式中：

ρ₁——樣品溶液中殼聚糖或殼聚糖鹽濃度，單位為微克每毫升，

ρ₂——樣品溶液中蛋白質濃度，單位為微克每毫升。