[發明專利]一種基于高分辨率溶解曲線方法鑒別青蟹的分子標記

有效

• 申請號: 201810367966.7
• 申請日: 2018-04-23
• 公開（公告）號: CN108531614B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 李榮華;李永亮;王春琳;母昌考;宋微微;葉央芳;劉磊;史策
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供一種用于鑒別青蟹的分子標記，包括有用于檢測欖綠青蟹的基因片段，其核苷酸序列為SEQ ID NO:1，用于檢測擬穴青蟹的基因片段，其其核苷酸序列為SEQ ID NO:2；用于檢測鋸緣青蟹的基因片段，其其核苷酸序列為SEQ ID NO:3；用于檢測紫螯青蟹的基因片段，其核苷酸序列為其核苷酸序列為SEQ ID NO:4。本發明通過篩選到的分子標記，通過高分辨率熔融曲線HRM對青蟹進行分型，從而快速、準確鑒別青蟹種質，為青蟹育苗養殖提供技術支持。

技術領域

本發明屬于分子輔助遺傳育種技術領域，具體涉及一種基于高分辨率溶解曲線方法鑒別青蟹的分子標記。

背景技術

青蟹屬(Scylla)隸屬于甲殼綱(Crustacea)、十足目(Decapode)、短尾亞目(Brachyura)、梭子蟹科(Portunidae)。廣泛分布于印度一西太平洋沿岸水域，包括東南亞、澳大利亞、日本、印度、南非等海域的紅樹林地區及河口內灣區，在我國主要分布于浙江、福建、臺灣、廣東、廣西和海南沿岸水域。青蟹具有個體大、生長快、適應性強、肉味鮮美、營養豐富等特點，已成為世界性的經濟養殖品種，但是隨著捕撈強度的加大，海洋環境的污染，野生青蟹資源嚴重衰退，根據陳丕茂等人在2002-2004年各礁區拖網調查,蟹類資源密度為180.985kg·km^-2,但經濟蟹類所占比例僅為26.69％，且在以往調查中出現率較高且經濟價值較高的鋸緣青蟹未捕到，因此青蟹的人工養殖迫在眉睫。由于不同青蟹在養殖生態學、繁殖學、營養學等生理生態方面有較大差異，不同種青蟹育苗要求不同，開展青蟹屬種類的鑒定研究有助于青蟹養殖技術的發展。

因此研究和保護青蟹種質的研究和鑒定技術，對我國青蟹產業可持續發展有著重要作用。

發明內容

本發明提供一種用于鑒別青蟹的SNP分子標記，以及用于檢測該分子標記的引物；通過檢測該分子標記能夠有效的區別青蟹的不同種，從而彌補現有技術的不足。

本發明首先提供一種鑒別青蟹的SNP分子標記，所述的分子標記包括有用于檢測欖綠青蟹(Scylla_olivacea)的基因片段，其核苷酸序列為SEQ ID NO:1用于檢測擬穴青蟹(Scylla paramamosain)的基因片段，其核苷酸序列為SEQ ID NO:2

用于檢測鋸緣青蟹(Scylla_serrata)的基因片段，其核苷酸序列為SEQ ID NO:3；

用于檢測紫螯青蟹(Scylla_tranquebarica)的基因片段，其核苷酸序列為其核苷酸序列為SEQ ID NO:4；

上述的分子標記在制備鑒別青蟹品種的制品中的應用；

本發明再一個方面提供一種鑒別青蟹品種的分子標記物；其中一種分子標記物為擴增引物對；

作為本發明實施例的一種具體記載，所述的引物對，其上游引物的序列為

AATTAACTAATGACATCATCTCATGG(SEQ ID NO:5)、

下游引物的序列為CGAGTTACATCTCGTCATCATTG(SEQ ID NO:6)；

本發明再一個方面提供一種基于高分辨率溶解曲線(HRM)鑒別青蟹的方法，是通過上述的引物對待檢測的青蟹的核酸樣品進行擴增，在對擴增產物測序后進行HRM分析來鑒別具體種。

所述的青蟹，為擬穴青蟹、鋸緣青蟹、欖綠青蟹和紫螯青蟹。

本發明還提供用于HRM分析的試劑盒，所述的試劑盒包含有上述的引物對。

本發明篩選獲得了能夠有效鑒別擬穴青蟹、鋸緣青蟹、欖綠青蟹和紫螯青蟹的基因片段，通過高分辨率熔融曲線HRM對青蟹進行分型，從而快速、準確鑒別青蟹種質，為青蟹育苗養殖提供技術支持。

附圖說明