[發明專利]一種制備樺褐孔菌多糖的方法

有效

• 申請號: 201810367859.4
• 申請日: 2018-04-23
• 公開（公告）號: CN108314745B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 賈薇;汪雯翰;張勁松;余冬生;張赫男;莊海寧;周帥;劉艷芳;楊焱
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P39/06;A61P37/04
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 張竹梅

本發明提供一種制備樺褐孔菌多糖的方法，該方法包括如下步驟：(1)樺褐孔菌子實體粉碎后用乙醇超聲脫脂，過濾，濾渣揮干酒精后，沸水提取3次，合并濾液后，減壓濃縮至料液比為1g：12mL的提取液；(2)提取液中加入硫酸銨溶解，然后加入0.5?3倍體積的叔丁醇，恒溫30℃反應15?90min，離心分層；(3)將下層水相使用截留分子量為8000?10000的透析袋流水透析，透析袋內溶液濃縮后干燥，可得到純化的樺褐孔菌多糖。本發明制備得到的多糖具有很強的抗氧化能力和體外免疫活性。

技術領域

本發明涉及食用菌提取領域，具體的說涉及一種制備特定分子量樺褐孔菌多糖的方法。

技術背景

樺褐孔菌屬于擔子菌亞門、層菌綱、非褐菌目、多孔菌科，是一種傳統的藥用真菌。主要分布于北緯45～50°之間的俄羅斯、北歐、波蘭、日本北海道以及中國黑龍江大小興安嶺和吉林長白山等高寒地區，由于其特殊的生長環境，被冠以“森林中的黑鉆石”、“奇幻的蘑菇”美稱。自十六世紀以來，在世界多個國家，樺褐孔菌廣泛用于治療多種消化道癌癥(如胃癌、肝癌和腸癌等)，心臟病和糖尿病等疑難雜癥。多糖是樺褐孔菌最重要的活性成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗突變、抗哮喘、增強免疫力等多種生物活性。近年來，隨著藥品和保健食品的興起，樺褐孔菌在醫藥和保健品等領域表現出的廣闊應用前景及開發價值引起了人們的興趣。

目前國內外學者們對食用菌多糖的提取進行了很多研究，主要的提取方法包括浸漬提取法、超聲波提取法、微波輔助提取方法、高壓脈沖電場輔助提取法等，但是這些提取方法復雜，溶劑消耗量大、高溫高壓和較長處理時間等，且需要后續多個分離純化步驟，難以大規模地應用。

三相法作為一種新的蛋白質分離純化技術，是一種安全有效的綠色分離技術，該方法包括鹽析、等電點沉淀及溶劑沉淀技術，將有機溶劑(一般為叔丁醇)和鹽與提取液反應，攪拌離心后，混合物分為三相，其中上相為有機溶劑相(即叔丁醇相)，下相為水相，中間相為蛋白相。三相分離技術可以選擇性的將需要的蛋白分離到中間相，而其余的成分分配到其它相中。大多研究者，主要將研究目標放在蛋白相中，使用三相法從食藥用菌中分離提取純化多糖尚未見報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種制備樺褐孔菌多糖的方法，該方法包括如下步驟：

(1)樺褐孔菌子實體粉碎后用乙醇超聲脫脂，過濾，濾渣揮干乙醇后，沸水提取3次，合并濾液后，減壓濃縮至料液比為1g:12mL(樺褐孔菌子實體粉質量：水的體積)的提取液；

(2)提取液中加入硫酸銨(硫酸銨在溶液中的質量百分比為10％-60％)溶解，然后加入0.5-3倍體積的叔丁醇，恒溫30℃反應15-90min，離心分層；

(3)將下層水相使用截留分子量為8000-10000的透析袋流水透析，透析袋內溶液濃縮后干燥，可得到純化的樺褐孔菌多糖。

三相分離法是一種用于分離純化蛋白質的方法，對含有多糖的水相研究至今未見報道，本發明利用三相法獲得樺褐孔菌多糖，可以快速高效簡便地獲得約為4-5萬分子量的樺褐孔菌多糖。

本發明提供一種新的從樺褐孔菌中獲得特定分子量活性多糖的方法，該方法設備簡單，操作簡便，由該方法制得的樺褐孔菌多糖分子量約為4-5萬，提取率可達2.20％以上，并且有較高的抗氧化活性和體外免疫活性。

附圖說明

圖1樺褐孔菌多糖分子量液相圖譜

圖2本發明實例中樺褐孔菌多糖對DPPH·自由基的清除率的影響

圖3本發明實例中樺褐孔菌多糖等價抗氧化能力的測定

圖4本發明實例中樺褐孔菌多糖對巨釋細胞RAW 264.7釋放NO的影響

具體實施方式