[發明專利]一種綬草種子快速育苗的方法

有效

• 申請號: 201810367796.2
• 申請日: 2018-04-23
• 公開（公告）號: CN108668893B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 劉保財;陳菁瑛;黃穎楨;趙云青
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院農業生物資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州市眾韜專利代理事務所(普通合伙) 35220
• 代理人: 方金芝;黃秀婷

1.一種綬草種子快速育苗的方法，其特征在于：所述的方法包括以下依序進行的步驟：

（1）外植體的采集階段

于每年5月至6月采集帶有發育飽滿的蒴果的綬草果穗備用；所述的發育飽滿的蒴果為果莢微黃的且即將裂開或剛裂開的蒴果；

（2）裝袋

將步驟（1）采集的蒴果及從蒴果中脫離的種子裝入紗網滅菌袋中；

（3）滅菌處理

將步驟（2）的裝有蒴果及從蒴果中脫離的種子的紗網滅菌袋進行滅菌處理，取出滅菌好的蒴果及從蒴果中脫離的種子，放入鋪有無菌濾紙的無菌容器內備用；

（4）初代培養階段

將步驟（3）滅菌處理后的蒴果中的種子剝離出來，并且將從蒴果中剝離出來的種子和從蒴果中脫離的種子共同接種到初代培養基進行初代培養至萌發形成原球莖或小芽；其中，所述的初代培養環境溫度為21-25℃，光照強度為2500-3500Lx，光照周期為10-14 h/d，培養周期為20-40天；

（5）繼代成苗階段

將步驟（4）初代培養萌發所形成的原球莖或小芽，接種到繼代壯苗與生根培養基中進行繼代培養；其中，所述的繼代培養的培養環境溫度為21-25℃，光照強度為3000-4500Lx，光照周期為10-14 h/d，培養周期為50-90天；

步驟（4）所述初代培養基為：優化后的MS培養基中加入60-85 g/L 土豆泥、0.2-0.5g/L花寶1號、0.7-0.9g/L蛋白胨、10-18 g/L蔗糖和6-9 g/L瓊脂，所述的初代培養基的pH值為5.3-5.6；

步驟（4）所述優化后的MS培養基由以下組分按照以下質量濃度配制而成：硝酸銨1645-1655mg/L、硝酸鉀1895-1905mg/L、氯化鈣435-445mg/L、硫酸鎂365-375mg/L、磷酸二氫鉀165-175mg/L、碘化鉀0.80-0.85mg/L、硼酸6.0-6.5mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37.0-37.5mg/L、硫酸錳22.0-22.5mg/L、硫酸鋅8.4-8.8mg/L、鉬酸鈉0.22-0.27mg/L、硫酸鐵27.5-28.0mg/L、V_B10.1mg/L、煙酸0.5mg/L、V_B60.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L和肌醇95-105mg/L；

步驟（5）所述繼代壯苗與生根培養基為：1/2 MS培養基中加入0.5-1.0mg/L 的ABT生根粉、65-95g/L的香蕉泥、0.2-0.5g/L活性炭、5-10g/L水解酪蛋白、2-5g/L酵母提取物、10-15g/L蔗糖和6-10g/L瓊脂，所述的繼代壯苗與生根培養基的pH值為6.0-6.2。

2.根據權利要求1所述的一種綬草種子快速育苗的方法，其特征在于：步驟（2）裝袋時，每15~30個蒴果裝一袋。

3.根據權利要求1所述的一種綬草種子快速育苗的方法，其特征在于：

步驟（2）所述的紗網滅菌袋的制備方法為：將長為6-10cm、寬為3-5cm的條形紗網沿長度方向對折，然后將兩側用線固定并留下一側開口，所述的紗網的目數為100~300目。

4.根據權利要求1所述的一種綬草種子快速育苗的方法，其特征在于：

步驟（3）所述的滅菌處理包括以下依序進行的步驟：

①將步驟（2）中所準備的裝有蒴果及從蒴果中脫離的種子的紗網滅菌袋用清水沖洗干凈；

②轉移到滅菌后的超凈工作臺上，轉入無菌瓶一內，倒入能夠淹沒整個裝有蒴果和從蒴果中脫離的種子的滅菌袋的無菌水進行沖洗；

③加入體積百分比濃度為70%-74%的酒精直至淹沒裝有蒴果及從蒴果中脫離的種子的紗網滅菌袋，滅菌30-45秒，用無菌水進行沖洗；

④倒入質量百分比濃度為0.05-0.15%的升汞直至淹沒裝有蒴果及從蒴果中脫離的種子的紗網滅菌袋，再添加3-6ml吐溫20到溶液中，滅菌3-6分鐘；

⑤最后將裝有蒴果及從蒴果中脫離的種子的紗網滅菌袋轉移至干凈的無菌瓶二內，用無菌水進行沖洗，取出并放置于盛有無菌濾紙的盤子上，用無菌濾紙吸去紗網滅菌袋表面多余的水分，用無菌鑷子解開紗網滅菌袋取出滅菌好的蒴果，放入干燥的無菌瓶三內備用。

5.根據權利要求1所述的一種綬草種子快速育苗的方法，其特征在于：步驟（5）所述繼代壯苗與生根培養基為：1/2 MS培養基中加入0.8mg/L 的ABT生根粉、65-95g/L的香蕉泥、0.2-0.4g/L活性炭、10g/L水解酪蛋白、5g/L酵母提取物、13g/L蔗糖和9g/L瓊脂，所述的繼代壯苗與生根培養基的pH值為6.1。