[發(fā)明專利]鮮藻液的制備方法及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810365631.1
• 申請日: 2018-04-23
• 公開（公告）號: CN108728366A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發(fā)明（設計）人: 林頂榮;黃美華
• 申請（專利權）人: 林頂榮;黃美華
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;A61K36/05;A61P35/00;C12R1/89
• 代理公司: 北京三友知識產(chǎn)權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;姚亮

本發(fā)明提供了一種鮮藻液的制備方法及其用途。本發(fā)明的鮮藻液的制備方法是藉由無菌培養(yǎng)及冷凍靜置后再迅速升溫，以達到縮短培養(yǎng)天數(shù)的功效；由前述制備方法所獲得的鮮藻液的藻細胞不但不產(chǎn)生變異且重金屬含量低，更可達到有效抗癌癥的用途。

技術領域

本發(fā)明是關于一種鮮藻液的制備方法，尤其是指藉由無菌培養(yǎng)以獲得鮮藻液的制備方法。本發(fā)明還關于一種前述制備方法所得的鮮藻液，尤其指所含藻細胞無變異的鮮藻液。本發(fā)明還關于一種前述鮮藻液的用途，尤其指鮮藻液用于抗癌癥的用途。

背景技術

綠球藻(Chlorella)是一種浮游生物，且當該藻體族群濃度比例過高時，藻細胞即會產(chǎn)生自體消化的現(xiàn)象，以維持藻體族群優(yōu)良的生存、繁殖環(huán)境，而產(chǎn)生自體消化的藻細胞，會產(chǎn)生對生物體有害的物質(zhì)，藻體亦會產(chǎn)生異味。由于綠球藻對于他種生物而言是極為營養(yǎng)的天然物質(zhì)，因此在自然環(huán)境中，常會成為他種生物寄生體，然而，當藻細胞被寄生時，會使藻體產(chǎn)生不可預知的細胞變異。此外，綠球藻本身能夠有效地吸附如重金屬、農(nóng)藥、化學毒素、多氯聯(lián)本、戴奧辛、輻射等毒素，但當綠球藻吸附一定量的毒素時亦會使藻細胞產(chǎn)生變異。

現(xiàn)有研究顯示，在急流水處是看不到浮游藻類生存繁殖的，如圖3所示，現(xiàn)有技術中綠球藻的培養(yǎng)模式卻都需依靠強力的水流攪拌、發(fā)酵培養(yǎng)及開放式培養(yǎng)(通氣培養(yǎng))，才能使藻細胞不沉淀，只要停止水流攪拌，藻細胞即沉淀死亡。因此，現(xiàn)有商業(yè)化培養(yǎng)、生產(chǎn)的綠球藻產(chǎn)品，皆屬細胞已產(chǎn)生變異的藻體，非原始的綠球藻藻體。此外，綠球藻細胞若經(jīng)超過50攝氏度以上的熱破壞、處于無水分狀態(tài)(噴霧干燥、冷凍干燥)、高溫破壁處理、高濃度且溫度高于0攝氏度存放超過6小時以及處于靜止狀態(tài)2小時，皆會使藻細胞會沉淀或使細胞產(chǎn)生變異。再者，目前檢測綠球藻產(chǎn)品的CNS檢驗標準的重金屬含量合格標準從原本5ppm改為20ppm以下，由此可見，現(xiàn)有技術綠球藻培養(yǎng)方法所生產(chǎn)所得的綠球藻不但皆已變異，且是充滿環(huán)境污染毒素的變異藻細胞。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術培養(yǎng)綠球藻的方法不但培養(yǎng)時間長、高溫及破壞細胞壁處理會導致綠球藻的藻細胞變異及變性(degeneration)、充滿污染毒素以及綠球藻細胞沉淀死亡的缺點，故本發(fā)明的一個目的在于提供一種鮮藻液的制備方法，藉由無菌培養(yǎng)及冷凍靜置后再迅速升溫，以達到縮短培養(yǎng)天數(shù)、不造成綠球藻的藻細胞變異以及重金屬含量低的功效。

為達上述目的，本發(fā)明提供一種鮮藻液的制備方法，其包括以下步驟：

將綠球藻于無菌設備中培養(yǎng)不超過3天，其中濃度培養(yǎng)達萬分之5以上，培養(yǎng)停留時間不超過6小時，以獲得培養(yǎng)混合液；其中所述綠球藻可為小球?qū)?Chlorella)；

將培養(yǎng)混合液迅速降溫至1℃以下但不結冰并進行離心，且加入無菌水以獲得藻液，其中藻液的濃度介于每毫升2.5毫克(mg/mL)至12.5mg/mL；

將藻液冷凍于0℃以下呈全結凍狀態(tài)并靜置12小時至24小時，再于10分鐘內(nèi)升溫至40℃至50℃，以形成鮮藻液。

較佳的，所述的綠球藻為蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)。

較佳的，所述的將綠球藻于無菌設備中培養(yǎng)時，攪拌培養(yǎng)液的流速介于每分鐘3米(m/min)至每分鐘20米。

更佳的，所述的將綠球藻于無菌設備中培養(yǎng)時，于光照條件下使綠球藻吸收碳源；當混合培養(yǎng)液的酸堿值低于6.8時，停止攪拌且同時維持該混合培養(yǎng)液呈現(xiàn)靜止懸浮狀態(tài)(不得沉淀)，待該混合培養(yǎng)液的酸堿值為7以上后再啟動攪拌，讓該混合培養(yǎng)液吸收碳源。

較佳的，所述的將藻液冷凍靜置再升溫時，可藉由微波或紅外線進行升溫。

較佳的，所述的將藻液冷凍于0℃以下呈全結凍狀態(tài)并靜置12小時至24小時的步驟中，冷凍的溫度介于-1℃至-21℃。