[發明專利]甜高粱蔗糖磷酸合成酶基因的表達檢測方法及擴增引物在審
| 申請號： | 201810365019.4 | 申請日： | 2018-04-23 |
| 公開（公告）號： | CN108441544A | 公開（公告）日： | 2018-08-24 |
| 發明（設計）人： | 李玥瑩;逄洪波;李雪梅;馬蓮菊;鄒劍秋;王蘭蘭;張穎;魏鑫;高華晨;錢美玲 | 申請（專利權）人： | 沈陽師范大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 沈陽維特專利商標事務所(普通合伙) 21229 | 代理人： | 楊群 |
| 地址： | 110034 遼寧省沈*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 甜高粱 蔗糖 快速檢測 群體 低糖 高糖 高粱 蔗糖磷酸合成酶 定性分析 父本 母本 定量分析 表達檢測 發育時期 擴增引物 生長時期 拔節期 表達量 差異性 含糖量 葉片 篩選 雜交 基因 收獲 分析 | ||
1.甜高粱蔗糖磷酸合成酶基因擴增引物，其特征在于，包括引物SPS-1和引物β-Actin，引物SPS-1包括SPS-1正向引物和SPS-1反向引物，核苷酸序列分別如SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2所示；引物β-Actin包括β-Actin正向引物和β-Actin反向引物，核苷酸序列分別如SEQID NO：3和SEQ ID NO：4所示。
2.如權利要求1所述的甜高粱蔗糖磷酸合成酶基因擴增引物，其特征在于，所述引物SPS-1擴增的目的片段的長度為121bp；所述引物β-Actin擴增的目的片段的長度為210bp。
3.一種檢測甜高粱蔗糖磷酸合成酶基因表達的快速PCR試劑，其特征在于，所述PCR試劑包括10×Buffer 2.5μl、25mg/ml MgCl2 2.5μl，100μmol/l dNTP 0.5μl，5U/μl Taq酶0.5μl，0.2μmol/l Forward Primer 1.0μl，0.2μmol/l Reverse Primer 1.0μl，cDNA模板1.0μl，用ddH2O補足25μl；
所述PCR試劑中的引物為權利要求1所述的引物SPS-1或引物β-Actin。
4.利用如權利要求3所述的試劑進行PCR反應的方法，其特征在于，包括如下反應程序：預變性94℃2min→32個擴增循環→延伸72℃10min→4℃保存，擴增循環包括如下步驟：變性94℃30s→退火53℃20s→延伸72℃1min 20s。
5.一種檢測蔗糖磷酸合成酶基因表達的快速熒光定量PCR試劑，其特征在于，所述熒光定量PCR試劑體積20μl，包括：2×SYBR Premix ExTaq II 10.0μl，ddH2O 6.0μl，0.2μmol/lForward Primer 0.8μl，0.2μmol/l Reverse Primer 0.8μl，ROX Reference DYE 0.4μl，cDNA模板2.0μl；
所述熒光定量PCR試劑中的引物為權利要求1所述的引物SPS-1或引物β-Actin。
6.利用如權利要求5所述的試劑進行快速熒光定量PCR的方法，其特征在于，包括如下反應程序：預變性95℃15min→35個擴增循環→溶解曲線程序53-95℃；擴增循環包括如下步驟：變性94℃20s→退火53℃20s→延伸72℃1min 20s。
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