[發明專利]一種制備谷胱甘肽合成酶系的方法

有效

• 申請號: 201810364570.7
• 申請日: 2018-04-23
• 公開（公告）號: CN108570458B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 姜華
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備谷胱甘肽合成酶系的方法，其特征為，包括以下步驟：

(1)將產谷胱甘肽合成酶系的微生物培養，得細胞培養液，離心，制得菌體細胞，將菌體細胞重懸于去離子水中，制得細胞質量百分比濃度為25～35wt％的溶液，破碎細胞，得到細胞破碎液；

(2)在20～30℃下配制乳酸鈉水溶液，將聚丙二醇加入到乳酸鈉溶液中，在總體系中使聚丙二醇的質量百分比濃度為20～30wt％、乳酸鈉的質量百分比濃度為15～25wt％，混合均勻，制得聚丙二醇/乳酸鈉雙水相體系溶液；

(3)將步驟(1)制得的細胞破碎液與步驟(2)制得的聚丙二醇/乳酸鈉雙水相體系溶液按體積比(1～2)：1混合均勻，靜置分相，制得乳酸鈉下相溶液和含有谷胱甘肽合成酶系的聚丙二醇上相溶液；

(4)向步驟(3)制得的聚丙二醇上相溶液中加入乳酸鈉，使乳酸鈉在總體系中的質量濃度為8～12wt％，混合均勻，靜置分相，制得乳酸鈉下相溶液和含有谷胱甘肽合成酶系的聚丙二醇上相溶液；

(5)向步驟(4)制得的聚丙二醇上相溶液中加入乳酸鈉，使乳酸鈉在總體系中的質量濃度為6～10wt％，調溶液pH值為7.5～8.5，混合均勻，靜置分相，制得含有谷胱甘肽合成酶系的乳酸鈉下相溶液和聚丙二醇上相溶液；

(6)用超濾膜對步驟(5)制得的乳酸鈉溶液過濾，收集截留液，冷凍干燥，制得谷胱甘肽合成酶系產品；

所述步驟(2)、(3)、(4)、(5)中的聚丙二醇的數均分子量為500,

所述步驟(1)中，破碎細胞采用高壓勻漿機，工作壓力為50～60MPa、溫度為5～10℃,

所述步驟(6)中，超濾膜的截留分子量為40000～50000Dal，工作壓力為0.1～0.2MPa、溫度為20～25℃。