[發(fā)明專利]一種用于RNA檢測(cè)的提取試劑及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810364337.9
• 申請(qǐng)日: 2018-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN108517351A
• 公開（公告）日: 2018-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張炳強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島瑞思德生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806;C12N15/10
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發(fā)明涉及基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于RNA檢測(cè)的提取試劑及其制備方法，由細(xì)胞壁破除劑、結(jié)合液和洗滌液組成；所述細(xì)胞壁破除劑由提取液A和提取液B組成，所述提取液A由Tris?Hcl、二乙基三胺五乙酸、SDS、硬脂酸酯、聚乙二醇辛基苯基醚、碳酸二甲酯、十二烷基肌氨酸鈉、β?巰基乙醇和水組成，所述提取液B由水飽和酚、丙三醇和三乙醇胺組成，所述洗滌液為乙醚水溶液；本發(fā)明以用于RNA檢測(cè)的提取試劑在提取細(xì)胞總RNA時(shí)，最終獲得總RNA的量占到47.2％，提取細(xì)胞中的總RNA的含量得到顯著提高，提高了RNA的提取速率，有利于廣泛應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因，具體是一種用于RNA檢測(cè)的提取試劑及其制備方法。

背景技術(shù)

RNA是以DNA的一條鏈為模板，以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈，主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá)，是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中，轉(zhuǎn)運(yùn)RNA是攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的m RNA結(jié)合，而后核糖體RNA(Ribosomal RNA,r RNA)將各個(gè)氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。

RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種，即A腺嘌呤，G鳥嘌呤C胞嘧啶，U尿嘧啶。其中，U尿嘧啶取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成為RNA的特征堿基。

RNA是存在于生物細(xì)胞內(nèi)將遺傳信息從DNA上轉(zhuǎn)移到功能蛋白上的信使或稱模板。近年來，隨著基因組工程進(jìn)展，我們迎來了后基因組時(shí)代，通過研究基因表達(dá)譜分析來闡釋基因的功能和基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制已成為目前研究的熱點(diǎn)。RNA提取技術(shù)不僅是分子生物學(xué)技術(shù)的重要組成部分，也是功能基因組學(xué)科研技術(shù)的重要基礎(chǔ)。

隨著細(xì)菌的后基因組時(shí)代的到來，尋求一種用于RNA檢測(cè)的提取試劑及其制備方法成為迫切需要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于RNA檢測(cè)的提取試劑及其制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種用于RNA檢測(cè)的提取試劑，由細(xì)胞壁破除劑、結(jié)合液和洗滌液組成；所述細(xì)胞壁破除劑由提取液A和提取液B組成，所述提取液A由Tris-Hcl、二乙基三胺五乙酸、SDS、硬脂酸酯、聚乙二醇辛基苯基醚、碳酸二甲酯、十二烷基肌氨酸鈉、β-巰基乙醇和水組成，所述提取液B由水飽和酚、丙三醇和三乙醇胺組成，所述洗滌液為乙醚水溶液。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述結(jié)合液選用苯酚和異硫氰酸胍按照質(zhì)量比1：1混合制成的水溶液。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述Tris-Hcl、二乙基三胺五乙酸和SDS在提取液A中的濃度為10mmol/L，所述碳酸二甲酯在提取液A中的濃度為8-12mmol/L，所述硬脂酸酯、聚乙二醇辛基苯基醚、十二烷基肌氨酸鈉和β-巰基乙醇在提取液A中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％、0.18-0.25％、0.23-0.28％和0.3％。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述水飽和酚、丙三醇和三乙醇胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)之比為96-98：1-3：1。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述乙醚水溶液的濃度0.78-1.18mol/L。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：其制備方法包括以下步驟：

a、制備提取液A：稱取Tris-Hcl、二乙基三胺五乙酸、SDS、硬脂酸酯、聚乙二醇辛基苯基醚、碳酸二甲酯、十二烷基肌氨酸鈉、β-巰基乙醇和水組成，置于真空攪拌釜中就，攪拌12-18min，得到提取液A，備用；

b、制備提取液B：將水飽和酚、丙三醇和三乙醇胺置于攪拌釜中，待攪拌釜內(nèi)的溫度升至35-48℃，攪拌25-33min，得到提取液B，備用；