[發明專利]含有光敏單元的核酸及其制備方法

有效

• 申請號: 201810363793.1
• 申請日: 2018-04-22
• 公開（公告）號: CN108484708B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 劉冬生
• 申請（專利權）人: 北京超精核酸科技有限公司
• 主分類號: C07H21/04
• 分類號: C07H21/04;C07H1/00
• 代理公司: 山東三邦知識產權代理事務所(普通合伙) 37308
• 代理人: 張立得;牛繼梅

1.一種含有光敏單元的核酸的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：制備亞磷酰胺酯

（1）醚化反應

將5-羥基-2-硝基苯甲醇溶于無水吡啶，冰浴攪拌下滴加溶有4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷的無水吡啶得到反應液，將反應液于0℃下攪拌1小時，恢復到室溫攪拌過夜，待反應結束后蒸發有機相得到粗產品，將粗產品提純處理得到5-羥基-2-硝基苯甲基-(4,4'-二甲氧基三苯基)醚；

其中，所述5-羥基-2-硝基苯甲醇與所述4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷的質量比1.7:4；所述溶于無水吡啶中的5-羥基-2-硝基苯甲醇的濃度為0.017g/mL；所述溶有5-羥基-2-硝基苯甲醇的無水吡啶與溶有4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷的無水吡啶的體積比為10:3；所述提純處理具體包括以下步驟：將粗產品溶于乙酸乙酯，經水洗、干燥、過濾、旋轉蒸發除去有機溶劑后，將產物溶于乙酸乙酯中，逐滴加入冷卻的正己烷中，過濾、干燥得到5-羥基-2-硝基苯甲基-(4,4'-二甲氧基三苯基)醚；

（2）酯化反應

將5-羥基-2-硝基苯甲基-(4,4'-二甲氧基三苯基)醚和無水三乙胺溶于無水四氫呋喃中，冰浴攪拌下滴加2-O-氰乙基-N,N-二異丙基氯代亞磷酰胺，室溫下攪拌2小時，反應結束后過濾不溶物，將濾液采用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，得到2-硝基苯甲基-(4,4'-二甲氧基三苯基)醚-5-(2-O-氰乙基-N,N-二異丙基亞磷酰胺酯)；

其中，所述5-羥基-2-硝基苯甲基-(4,4'-二甲氧基三苯基)醚、無水三乙胺和2-O-氰乙基-N,N-二異丙基氯代亞磷酰胺的質量比為2.3:1.2:1.27；所述無水四氫呋喃中無水三乙胺的濃度為0.024g/mL；

步驟二：制備含有光敏單元的核酸

將2-硝基苯甲基-(4,4'-二甲氧基三苯基)醚-5-(2-O-氰乙基-N,N-二異丙基亞磷酰胺酯)溶于無水乙腈中作為端基修飾位試劑與核酸進行反應，將反應產物分散于氨水中，密閉加熱，離心除去不溶物，將溶液濃縮處理，得到含有光敏單元的核酸粗產物，將粗產物通過高效液相色譜進行分離和純化，獲得含有光敏單元的核酸；

其中，所述含有光敏單元的核酸，結構式如式Ⅰ所示：

式Ⅰ。