[發明專利]含有靶向DHCR24基因的干擾片段序列的重組腺病毒干擾載體及其降血脂中的應用

有效

• 申請號: 201810361398.X
• 申請日: 2018-04-20
• 公開（公告）號: CN108441515B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 蘆秀麗;楊曉雄;張月;常洋濤;全曉平;高兵
• 申請（專利權）人: 遼寧大學
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N15/113;A61K48/00;A61P3/06
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

本發明提供含有靶向DHCR24基因的干擾片段序列的重組腺病毒干擾載體及其在降血脂中的應用。DHCR24是膽固醇內源性合成中最后一步的酶，重組腺病毒干擾載體Ad?SiDHCR24能夠靶向DHCR24基因，干擾其表達，從而降低細胞膽固醇的生物合成。本發明表明，Ad?SiDHCR24在細胞和動物水平干擾其靶基因DHCR24的表達，不僅能夠在細胞水平降低膽固醇，還能夠在動物實驗的小鼠高血脂模型中發揮顯著的降血脂效果。

技術領域

本發明涉及含有靶向DHCR24基因的干擾片段序列的重組腺病毒干擾載體Ad-SiDHCR24，以及使用該重組腺病毒干擾載體制備防治高血脂疾病的藥物中的應用。

背景技術

高血脂癥狀表現為血液中膽固醇、低密度脂蛋白固醇、甘油三酯水平高于正常值，而高密度脂蛋白固醇低于正常值，這些因子是動脈粥樣硬化以及心血管疾病的重要風險評估因素。因此，降膽固醇一直是這一類疾病的主要治療手段。

低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein，LDL)是一個獨立的高血脂評估風險因素，LDL將肝臟或者腸道中的膽固醇運輸到組織。由于LDL含有高水平的膽固醇，當血漿中LDL水平增加時，其可能在動脈壁堆積，導致冠狀動脈疾病和心臟病發病風險增加。因此LDL被認為是“有害的膽固醇”。

他汀類藥物是傳統經典的降膽固醇藥物，它是膽固醇合成過程中限速酶HMG-COA還原酶的抑制劑，通過阻斷底物HMG-COA轉化為甲羥戊酸途徑從而降低膽固醇的合成。盡管他汀類藥物已經在世界范圍顯示出降低心血管疾病發生的風險，但仍有一部分病人不能達到理想的LDL-C(LDL膽固醇)水平或者由于副作用而停止治療。另一方面，傳統的非他汀類藥物如煙酸、膽酸螯合劑、貝特類藥物和Ω-3脂肪酸由于缺乏強有力的降低心血管疾病的風險證據，其降血脂治療廣受爭議。因此開發新型降膽固醇的藥物需求仍然很迫切。

SiRNA(Small interfering RNA)是一種小RNA分子，由Dicer(RNAaseⅢ家族中對雙鏈RNA具有特異性的活性核酸內切酶)加工而成。siRNA與之互補的目標mRNA結合，導致靶基因沉默。利用siRNA干擾其同源靶基因的理論，siRNA的互補DNA序列經常被用來當做工具或藥物，通過干擾其同源基因下調其表達實現治療某些疾病的目的。但是siRNA單獨針對其靶基因的單一的RNA靶點序列，容易造成RNA干擾的脫靶效應。

體外制備siRNAs有三種方法，化學合成、體外轉錄和用RNaseIII消化長片段dsRNA制備siRNA。化學合成方法適用于已經找到最有效的siRNA的情況下，需要大量siRNA進行研究，但由于價格比較高和定制周期長，不適用于篩選siRNA等長時間的研究。體外轉錄方法以DNA Oligo為模版，通過體外轉錄合成siRNAs，成本相對化學合成法而言比較低，而且能夠比化學合成法更快的得到siRNAs。此方法得到的siRNAs毒性小，穩定性好，效率高，只需要化學合成的siRNA量的1/10就可以達到化學合成siRNA所能達到的效果，從而使轉染效率更高。不足之處是實驗的規模受到限制，雖然一次體外轉錄合成能提供足夠做數百次轉染的siRNAs，但是反應規模和量始終有一定的限制。而且和化學合成相比，還是需要占用研究人員相當的時間。dsRNA消化法的主要優點在于可以跳過檢測和篩選有效siRNA序列的步驟，為研究人員節省時間和金錢。不過這種方法的缺點也很明顯，就是有可能引發非特異的基因沉默，特別是同源或者是密切相關的基因。