[發明專利]墨旱蓮的檢測試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 201810355669.0
• 申請日: 2018-04-19
• 公開（公告）號: CN108504761A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 梅志強;傅俊江;劉曉燕;鄭美玲
• 申請（專利權）人: 西南醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 張娟;劉華玲

本發明公開了一種墨旱蓮特異性SCAR分子標記，還公開了擴增該分子標記序列的引物對及其用途，還公開了墨旱蓮的檢測試劑盒和檢測方法。本發明檢測試劑盒和檢測方法可以準確、有效的鑒別墨旱蓮，特異性強，耗時短，應用前景良好。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種墨旱蓮的檢測試劑盒和檢測方法。

背景技術

墨旱蓮為菊科植物鱧腸(Eclipta prostrate)的全草，每年夏、秋兩季割取全草，除去泥沙，曬干或陰干即可入藥。由于搓揉它的莖葉時，可見黑色的汁液流出而得名。全草藥用，主要含有三萜類，香豆草醚類，黃酮類，甾體類，噻吩類和揮發油等物質，具有很強的免疫調節、保肝、抗纖維化、抗腫瘤、抗自由基抗氧化和酶激活等藥理作用，臨床上常用于治療吐血、衄血、尿血、便血、血痢、刀傷出血、須發早白、白喉、淋濁、帶下、陰部濕癢等癥。

但墨旱蓮和趕黃草形態相似，容易混淆，從而影響用藥的準確性。因此，有效鑒別墨旱蓮，是非常必要的。

發明內容

為了克服現有技術的缺陷，本發明提供了一種方便、快速、準確地檢測墨旱蓮的試劑盒和方法。

本發明提供了一種墨旱蓮特異性SCAR分子標記，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明還提供了擴增SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的引物對。

其中，它是SEQ ID NO.2～3所示的引物對。

本發明還提供了上述SCAR分子標記、上述引物對在檢測墨旱蓮中的用途。

本發明還提供了一種墨旱蓮的檢測試劑盒，包括檢測SEQ ID NO.1所述核苷酸序列的試劑。

其中，所述試劑包括擴增SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的試劑。

其中，所述擴增的試劑包括SEQ ID NO.2～3所示的引物對。

其中，所述墨旱蓮為產自四川、江西、安徽的墨旱蓮。

本發明還提供了一種墨旱蓮的檢測方法，包括如下步驟：

a、DNA提取：提取待檢樣本中的DNA；

b、檢測：用上述試劑盒檢測待檢樣本，即可。

本發明通過檢測墨旱蓮特異性SCAR分子標記，可以有效鑒定待檢樣本是否為墨旱蓮，將墨旱蓮與趕黃草及其它植物種類進行準確區分，為墨旱蓮藥材的合理使用提供指導，本發明方法操作簡便，具有良好的應用前景。

顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。

附圖說明

圖1.墨旱蓮的改良RAPD擴增。箭頭為N7-11的RPAD片段，用于膠回收和克隆。通道1-9是分別是來自江西、安徽、陜西、湖南、四川瀘州、四川西昌、貴州、湖北和山西的趕黃草，10為來自瀘州的墨旱蓮。

圖2陽性克隆的菌落PCR鑒定。黑色所指通道的陽性克隆用于Sanger測序。通道“M”顯示有分子重量(bp)的DL2000DNA標記。泳道1-2分別代表不同陽性克隆的菌落。

圖3不同墨旱蓮品種的鑒定。通道1、2和3是來自四川、江西和安徽的墨旱蓮；4，5，6是來自四川，江西和安徽的趕黃草。