[發明專利]從雞血中提取抑菌肽的方法

在審

• 申請號: 201810355327.9
• 申請日: 2018-04-19
• 公開（公告）號: CN108504707A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 全盈園
• 申請（專利權）人: 金華市鐵騎士生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C12R1/685
• 代理公司: 北京華識知識產權代理有限公司 11530
• 代理人: 趙永強

本發明公開了從雞血中提取抑菌肽的方法，其具體步驟為：向新鮮雞血中加入六偏磷酸鈉水溶液，攪拌均勻，離心后棄沉淀，調節上清液的pH值，即得抗凝雞血；利用抗凝雞血粉配制發酵培養基，接種黑曲霉發酵，離心上清液即為發酵液；將發酵液超濾獲得抗菌肽粗提液；將抗菌肽粗提液進行凝膠層析，上樣后用雙蒸水洗脫，收集抗菌活性較高的組分，冷凍干燥即得雞血抗菌肽。有益效果為：本發明提取方法簡單可行，提取效率、得率和純度高，制得的抗菌肽活性高、可快速殺滅細菌、有廣譜的抗菌特性的雞血抗菌肽的提取方法。

技術領域

本發明涉及生物提取技術領域，特別涉及從雞血中提取抑菌肽的方法。

背景技術

自從抗生素被發現后，由于它具有良好的抑菌效果被廣泛地應用于醫療、傳統獸藥和飼料添加劑中，但是也由于抗生素的過度使用，致病菌的耐藥性和藥物殘留等問題越來越嚴重，逐漸引起了人們的重視，尋找抗生素的有效替代品，解決耐藥性及藥物殘留問題，迫在眉睫。而抗菌肽（Antimicrobial peptides，AMPs）是一種原核生物及真核生物均能產生的、分布廣泛且種類繁多的、具有廣譜抗菌活性的多肽類物質，它對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌、原生動物、癌細胞、病毒等均有明顯的抑制作用，被視為具有極大應用前景的抗生素替代品，成為了國內外的研究熱點。抗菌肽最早是瑞典科學家Boman等在一種名叫惜古比天蠶（Hyalophora cecropia）的昆蟲體內誘導并分離純化得到的，并將其命名為天蠶素（Cecropins）。到目前為止，人們紛紛從各種原核及真核生物當中鑒定出并分離得到1700多種抗菌肽類物質。

抗菌肽的種類繁多，分布也十分廣泛，隨著對抗菌肽的研究深入，抗菌肽的類別也越來越清晰。目前，抗菌肽一般根據以下幾個方面進行分類：根據抗菌肽的合成途徑將抗菌肽分為非核糖體合成抗菌肽（non-ribosomally synthesized peptides）和核糖體合成抗菌肽（ribosomally synthesized peptides）兩類。根據抗菌肽的結構分為：（1）含α-螺旋的線性抗菌肽；（2）富含某些氨基酸殘基的抗菌肽；（3）含1個二硫鍵的抗菌肽；（4）具有β-折疊結構的抗菌肽；（5）由已知多肽衍生的具有抗菌活性的肽[31]。根據抗菌肽的來源分為：（1）細菌抗菌肽，如多粘菌素、桿菌肽等；（2）昆蟲抗菌肽，如天蠶素、昆蟲防御素等；（3）植物源抗菌肽，如植物防御素、鳳仙花素等；（4）蛙類動物抗菌肽，如蛙皮肽；（5）水生動物抗菌肽，包括魚類、貝類、甲殼動物類抗菌肽，種類繁多復雜；（6）哺乳動物抗菌肽，主要有防御素（Defensins）、富組蛋白（Histatins）和Cathelicidins三種。目前在雞血中提取、純化抗菌肽并研究其抗菌活性的研究卻很少。因為雞血中起到主要作用的免疫細胞的白細胞，而其中中性粒細胞約占雞血中白細胞總量的70%，所以從雞血液中提取、純化抗菌肽是可行的。

現有技術如授權公告號為CN 104164467 B的中國發明專利，公開了一種從雞血中提取抗菌肽的方法，該方法包括如下步驟：(1)取雞血，進行血細胞破碎后加入木瓜蛋白酶進行酶解；(2)向酶解液中加入乙酸浸提，離心取上清，調節pH至6.0±0.5，獲得雞血抗菌肽粗提物。實驗證明，利用該方法從雞血中提取的抗菌肽對大腸桿菌、嗜水氣單胞菌、綠膿桿菌等常見的致病菌有明顯的抑制作用。該方法為生產抗菌肽提供了一個新的途徑和方法，具有操作方便快捷、設備簡單、分離提取率高、成本低的優點，可應用于大規模地從新鮮雞血中分離純化抗菌肽的生產。但是該雞血抑菌劑酶解前未經抗凝處理，酶解效率低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種投入低、操作簡單、蛋白質降解效果好、抗菌肽得率和純度高，制得的抗菌肽活性高、可快速殺滅細菌、有廣譜的抗菌特性的從雞血中提取抑菌肽的方法。

本發明針對上述技術中提到的問題，采取的技術方案為：