[發明專利]大腸桿菌周質空間表達的蛋白的提取方法在審
| 申請號： | 201810355270.2 | 申請日： | 2018-04-19 |
| 公開（公告）號： | CN110386978A | 公開（公告）日： | 2019-10-29 |
| 發明（設計）人： | 馮軍;吳勇;張慶彬;黃宗慶;化浩舉;李樂樂 | 申請（專利權）人： | 上海多米瑞生物技術有限公司;上海醫藥工業研究院 |
| 主分類號： | C07K16/00 | 分類號： | C07K16/00;C07K1/30 |
| 代理公司： | 上海一平知識產權代理有限公司 31266 | 代理人： | 胡丹;徐迅 |
| 地址： | 201203 上海市浦東新區中國（*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大腸桿菌周質 蛋白 空間表達 目的蛋白 提取液 周質 高溫加熱處理 生物醫藥領域 重組大腸桿菌 酸性緩沖液 蛋白質層 菌體混懸 細胞碎片 絮狀沉淀 勻漿處理 周質空間 純化液 有效地 除掉 二價 去除 保證 | ||
1.一種大腸桿菌周質空間蛋白提取液的制備方法，其特征在于，包括步驟：
(i)混勻步驟，將周質空間分泌表達目的蛋白的重組大腸桿菌菌體混勻于酸性溶液中，獲得菌體混懸液；
(ii)勻漿步驟，對步驟(i)中的菌體混懸液進行N次勻漿處理，獲得勻漿液，其中N為≥1的正整數，優選N為1-15，更優選N為2-10，最優選N為3-5；
(iii)雜質去除步驟，對步驟(ii)中獲得的勻漿液進行雜質去除處理，獲得大腸桿菌周質空間蛋白提取液。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述混勻步驟中，酸性緩沖液為：60mmol/L檸檬酸，50mmol/L MgSO4 pH4.0溶液。
3.一種蛋白的提取方法，其特征在于，包括步驟：
(1)提供一蛋白提取液樣品，其中含有待純化的蛋白；
(2)調節(1)中蛋白提取液樣品的pH為3.5-8.0，獲得蛋白處理液1；
(3)對(2)中蛋白處理液1進行加熱處理，所述熱處理溫度為30-80℃，獲得蛋白處理液2；
(4)任選地，從蛋白處理液2中去除沉淀，獲得蛋白粗純化液。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白為大腸桿菌周質空間表達的蛋白。
5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白為大腸桿菌周質空間表達的Fab蛋白。
6.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述加熱處理溫度為30-80℃，較佳地為50-75℃，更佳地為60-75℃，最佳地為70℃。
7.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述pH為3.5-8.5，較佳地為5.0-8.5，更佳地為7.5-8.5，最佳地為8.0。
8.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的時間為1-10h，較佳地為2-8h，更佳地為3-6h，最佳地為4h。
9.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述加熱處理溫度為65-70℃，pH為7.0-8.0，加熱處理的時間為3-4h。
10.一種對微生物提取液進行粗純化處理方法，其特征在于，包括步驟：
(a)提供一微生物提取液樣品，其中含有待粗純化的蛋白；
(b)調節(a)中微生物提取液樣品的pH為3.5-8.0，獲得第一處理液；
(c)對(b)中第一處理液進行加熱處理，所述熱處理溫度為30-80℃，獲得第二處理液；
(d)任選地，從第二處理液中去除沉淀，獲得蛋白粗純化液。
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