[發(fā)明專利]一種工程菌及其在丹參素和丙氨酸聯(lián)產(chǎn)中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810352695.8
• 申請日: 2018-04-19
• 公開（公告）號: CN108865960B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔡宇杰;熊天真;蔣靜;丁彥蕊;白亞軍;鄭曉暉
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P7/42;C12P13/06;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種重組大腸桿菌，其特征在于，所述重組大腸桿菌同時表達(dá)了葡萄糖脫氫酶、α-羥基羧酸脫氫酶和L-α-氨基酸轉(zhuǎn)氨酶，并在宿主大腸桿菌的基礎(chǔ)上敲除了酚類化合物分解相關(guān)的基因；

α-羥基羧酸脫氫酶為D-α-羥基羧酸脫氫酶，其氨基酸序列是NCBI上登錄號為WP_002335374.1或EEI22188.1的序列；α-羥基羧酸脫氫酶為L-α-羥基羧酸脫氫酶，其氨基酸序列是NCBI上登錄號為WP_013858488.1、WP_003607654.1或WP_035430779.1的序列；所述葡萄糖脫氫酶的氨基酸序列是NCBI上登錄號為WP_013351020.1的序列；所述L-α-氨基酸轉(zhuǎn)氨酶的氨基酸序列是NCBI上登錄號為WP_000462687.1、WP_000486988.1、WP_003643296.1或YP_806114.1的序列；所述酚類分解基因為hpaD、mhpB中的任意一種或者兩種組合；所述hpaD的核苷酸序列如NCBI上登錄號為NC_012892第4505585~4506436位所示；所述mhpB的核苷酸序列如NCBI上登錄號為NC_012892第339806~340750位所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，所述重組大腸桿菌還強(qiáng)化表達(dá)了丙酮酸轉(zhuǎn)運基因、NAD合成基因、磷酸吡哆醛合成基因一種或者多種；所述強(qiáng)化表達(dá)的基因為btsT和ybdD、nadA、pdxJ中的任意一種或多種；所述btsT的核苷酸序列如NCBI上登錄號為NC_012892第4496239~4498389位所示，所述ybdD的核苷酸序列如NCBI上登錄號為NC_012892第592652~592849位所示；所述nadA的核苷酸序列如NCBI上登錄號為NC_012892第740487~741530位所示；所述pdxJ的核苷酸序列如NCBI上登錄號為NC_012892第2567591~2568322位所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組大腸桿菌，其特征在于，所述強(qiáng)化表達(dá)是通過將宿主大腸桿菌基因組上所要強(qiáng)化表達(dá)的基因前增加組成型啟動子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，所述葡萄糖脫氫酶、α-羥基羧酸脫氫酶、L-α-氨基酸轉(zhuǎn)氨酶是通過pCOLADuet共表達(dá)的。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，所述宿主菌為Escherichia coliBL21(DE3)。

6.一種生產(chǎn)丹參素的方法，其特征在于，所述方法是利用權(quán)利要求1-5任一所述的重組大腸桿菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法是進(jìn)行全細(xì)胞轉(zhuǎn)化生產(chǎn)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述全細(xì)胞轉(zhuǎn)化生產(chǎn)的體系中，細(xì)胞濕重為1-200g/L，左旋多巴濃度為1-200g/L，丙酮酸濃度為1-200g/L，葡萄糖濃度為1-200g/L，pH 6.0-9.0；于15-40℃反應(yīng)，時間1-48小時。