[發明專利]一種豬塞尼卡谷病毒的RT-PCR檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810350095.8
• 申請日: 2018-04-18
• 公開（公告）號: CN108300811A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 滕建芬
• 申請（專利權）人: 滕建芬
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 廣州天河萬研知識產權代理事務所(普通合伙) 44418
• 代理人: 劉強;陳軒

本發明公開了一種豬塞尼卡谷病毒的RT?PCR檢測試劑盒及其檢測方法，所述的引物組包括引物S1、S2，其中：S1:5’?AACTTAGGCTAGCTTACCAT?3’,S2：5’?CAATAGCTGAGTCGACCTGTATG?3’，S3：5’?ATAAGCTGAGTCGACTGAT?3’。本發明設計特異性引物S1、S2和S3，能夠對豬塞尼卡谷病毒進行特異性擴增。本發明的專用試劑盒具有很強的敏感性、特異性，且與病毒分離和IFA等方法相比符合率可達100％，能夠廣泛用于臨床豬塞尼卡谷病毒的鑒別診斷。

技術領域

本發明涉及獸醫生物病毒檢測技術領域，具體涉及一種豬塞尼卡谷病毒的RT-PCR檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

2002年，美國基因治療公司偶然從PER.C6細胞(轉化的胎兒成視網膜細胞)培養基中首次發現并分離到一種新的病毒——塞尼卡谷病毒(SenecaValley virus，SVV，另稱Seneca virus A，SVA)，是一種無囊膜、單鏈、正股RNA病毒，屬于小RNA病毒科，2015年，國際病毒分類委員會(ICTV)將該病毒劃分至新的病毒屬——塞尼卡病毒屬。

豬感染后通常表現為急性、自限性水皰癥狀。臨床表現為采食量下降，之后鼻吻出現水皰性病變，可見1個或多個大小不一、充滿液體的囊泡；囊泡破裂后發展成潰瘍病變，在感染后10-15d形成厚痂。水皰性及潰瘍性病變多出現于蹄冠部趾間裂和冠狀帶周圍，導致邊緣上皮疏松壞死，嚴重者跛行，站立困難。有些母豬腹部和乳房部出現紅色斑點，或伴有發熱和厭食癥狀，甚至發燒(39.5-40.5℃)，部分跛行的母豬體溫可達41.0℃。新生仔豬體態虛弱，嗜睡，不愿吸乳，并出現急性死亡，在蹄掌部可見部分化膿性小泡。

豬感染SVV-Ⅰ后出現水皰的臨床表現與感染口蹄疫(FMD)、豬水皰病(SVD)、水皰性口炎(VS)等極為相似，主要都是鼻子和冠狀帶出現水泡、跛行、厭食、嗜睡、發燒，并且持續排毒。建立一種豬塞尼卡谷病毒的反轉錄PCR診斷方法和專用試劑盒，能夠方便在疫病發生早期快速、準確的診斷疫病，為疫病的防控提供有效的參考。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種豬塞尼卡谷病毒的RT-PCR檢測試劑盒及其檢測方法，該試劑盒能夠快速區分豬塞尼卡谷病毒。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種豬塞尼卡谷病毒的RT-PCR檢測試劑盒，所述的引物組包括引物S1、S2、S3，其中：

S1：5’-AACTTAGGCTAGCTTACCAT-3’；

S2：5’-CAATAGCTGAGTCGACCTGTATG-3’；

S3：5’-ATAAGCTGAGTCGACTGAT-3’。

一種所述的引物組在制備用于豬塞尼卡谷病毒鑒別診斷試劑盒中的應用。

一種所述的引物組的豬塞尼卡谷病毒鑒別診斷試劑盒。

所述的試劑盒還包括核酸提取試劑、反轉錄試劑、PCR擴增試劑、和/或瓊脂糖凝膠電泳試劑。

所述的反轉錄試劑包括10×M-MLV緩沖液、dNTP、M-MLV反轉錄酶、RNase酶抑制劑、S2引物。

所述的PCR擴增試劑包括10×PCR擴增緩沖液、dNTP、S1引物、S2引物、Taq DNA聚合酶和雙蒸水。

所述的PCR擴增試劑所構建的PCR擴增體系為：10×PCR擴增緩沖液5.0μL、2.5mmol/L dNTP8.0μL、10mmol/L S1引物1.0μL、10mmol/L S2引物1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、模板3.0μL，補加雙蒸水至50μL。