[發(fā)明專利]一種酶解豬動(dòng)脈血管制備彈力蛋白肽的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810348979.X | 申請(qǐng)日： | 2018-04-18 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108588155A | 公開（公告）日： | 2018-09-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 岳娟;蔣麗剛;畢天宇;邱玉想;徐思偉;席長洪 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 珀萊雅化妝品股份有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12P21/06 | 分類號(hào)： | C12P21/06;C07K14/78;C07K1/34 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 310012 浙江省杭州市西湖區(qū)*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 彈力蛋白 動(dòng)脈血管 酶解液 粗品 瀝干 酶解 制備 浸泡 蒸餾水 基質(zhì)金屬蛋白酶 氫氧化鈉水溶液 超聲輔助酶解 磷酸鹽緩沖液 彈力蛋白酶 紅外線輻射 鹽酸水溶液 乙酸水溶液 反復(fù)洗滌 輔助酶解 離心處理 酶解底物 酶解效率 取上清液 去離子水 超濾膜 超濾液 質(zhì)量比 超濾 絞碎 滅酶 乙醚 冷凍 新鮮 | ||
1.一種酶解豬動(dòng)脈血管制備彈力蛋白肽的方法，其特征在于采用以下步驟：
A、取新鮮的豬動(dòng)脈血管，清洗干凈后，瀝干，用絞肉機(jī)絞碎，得碎豬動(dòng)脈血管；
B、按質(zhì)量比1：20稱取所述碎豬動(dòng)脈血管和0.1mol·L-1的氫氧化鈉水溶液，所述碎豬動(dòng)脈血管在所述氫氧化鈉水溶液中浸泡24h，撈出后用蒸餾水洗至中性；然后用碎豬動(dòng)脈血管質(zhì)量20倍的0.6mol·L-1的鹽酸水溶液浸泡24h，然后用蒸餾水洗至中性；最后用碎豬動(dòng)脈血管質(zhì)量2倍的乙醚浸泡24h，撈出后再次使用碎豬動(dòng)脈血管質(zhì)量2倍的乙醚浸泡24h，得預(yù)處理的豬動(dòng)脈血管；
C、將所述預(yù)處理的豬動(dòng)脈血管使用蒸餾水反復(fù)洗滌，瀝干后用等質(zhì)量的0.5mol·L-1的乙酸水溶液浸泡3天，然后采用高速冷凍離心機(jī)，在1-5℃、2500-4500r·min-1條件下離心10-30min，得彈力蛋白粗品；
D、按質(zhì)量比1：20-100稱取所述彈力蛋白粗品和去離子水，混合后作為酶解底物，用1mol·L-1的NaOH水溶液調(diào)節(jié)所述酶解底物pH至8.0-9.0，加入pH為8.0-9.0的磷酸鹽緩沖液，然后向所述酶解底物中加入彈力蛋白酶和基質(zhì)金屬蛋白酶，所述彈力蛋白酶與基質(zhì)金屬蛋白酶的質(zhì)量比為1-5：1，所述彈力蛋白酶和基質(zhì)金屬蛋白酶的總質(zhì)量占酶解底物質(zhì)量的1-5%；室溫下采用超聲輔助酶解，超聲波功率100-400W，時(shí)間5-15min，得初步酶解液；所述基質(zhì)金屬蛋白酶為MMP-1型；
E、將所述初步酶解液，在功率為50-400W、波長為5-20μm的紅外線輻射下繼續(xù)輔助酶解3-10min；當(dāng)所述初步酶解液溫度升至40-60℃時(shí)，關(guān)閉紅外線，酶解完畢；然后在80-100℃環(huán)境下滅酶處理5-15min，得酶解液；
F、將所述酶解液在12000r/min下離心15min，取上清液，采用截留分子量為10kDa的超濾膜，在超濾壓力為0.2MPa，超濾溫度40℃的條件下進(jìn)行恒體積超濾，加水量為酶解液體積的3倍，得超濾液；
G、將所述超濾液在-80℃、-2Pa條件下冷凍干燥，得彈力蛋白肽。
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