[發(fā)明專利]基于特異性序列的維氏氣單胞菌檢測引物、試劑盒、檢測方法及其開發(fā)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810348653.7
• 申請日: 2018-04-18
• 公開（公告）號: CN108504756B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬香;劉柱;唐燕瓊;唐鴻倩;胡新文;王丹
• 申請（專利權(quán)）人: 海南大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/6811;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京天馳君泰律師事務(wù)所 11592
• 代理人: 孟銳

本發(fā)明涉及用于檢測維氏氣單胞菌的引物對，所述引物對的正向引物的核苷酸序列選自SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.3，所述引物對的反向引物的核苷酸序列選自SEQ ID NO.2和/或SEQ ID NO.4。本發(fā)明還涉及包含所述引物對或引物對組合的試劑、試劑盒及其在檢測維氏氣單胞菌中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及開發(fā)用于檢測維氏氣單胞菌的引物的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于特異性序列的維氏氣單胞菌的檢測引物、包含該引物的試劑、試劑盒、維氏氣單胞菌的檢測方法以及開發(fā)維氏氣單胞菌的檢測引物的方法，屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)又被稱為維羅納氣單胞菌、維隆氣單胞菌、凡隆氣單胞菌，是一種革蘭氏陰性桿狀細菌，屬無芽孢兼性厭氧型。該菌散在分布，普遍存在于淡水、污水、土壤乃至海水中，兩端鈍圓，大小約為0.3-0.7μm×1.2-2.5μm，具鞭毛，能運動(Kirov SM,Tassell BC,Semmler AB,O'Donovan LA,Rabaan AA等.“Lateral flagellaand swarming motility in Aeromonas species”[J].J Bacteriol.2002,184(2):547-555)。

維氏氣單胞菌屬于強毒病原菌，致病過程主要包括黏附-侵襲-宿主體內(nèi)定殖以及毒素分泌等過程，期間產(chǎn)生一系列毒力因子，如氣溶素(aerolysin)、腸毒素(enterotoxin)和粘附因子(adherence factor)等，這些毒力因子在水產(chǎn)動物、人類甚至畜禽感染中起著舉足輕重的作用(袁旦一,汪開毓,陳德芳,黃凌遠,王均等.“維氏氣單胞菌在人工感染斑點叉尾鮰體內(nèi)的組織定位和動態(tài)分布研究”[C].中國南方漁業(yè)論壇暨第二十九次學(xué)術(shù)會議論文集.廣西北海,2013)。

該菌侵染宿主范圍十分廣泛。首先，該菌是已知最古老的魚類病原菌之一，感染多種淡水魚類、海水魚類等，給水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類以及野生魚類帶來了嚴重威脅(Bossi-KüpferM,Genini A,Peduzzi R,Demarta A.“Tracheobronchitis caused by Aeromonas veroniibiovar sobria after near-drowning”[J].J Med Microbiol.2007,56(Pt 11):1563-1564)。例如，草魚感染維氏氣單胞菌時局部出血、有腹水、脾臟腫大等癥狀(王浩,權(quán)可艷,徐麗娟,李夢影,呂利群.“恩諾沙星控制草魚維氏氣單胞菌的用藥方案”[J].淡水漁業(yè),2013,43(2):47-53)。

同時，維氏氣單胞菌還可以感染節(jié)肢動物和爬行類動物，如中華絨螯蟹(房海,陳翠珍,張曉君,鞏元芳,葛幕湘.“中華絨螯蟹病原維氏氣單胞菌的檢驗”[J].中國人獸共患病學(xué)報.2008,24(1):45-49)、中華鱉(錢明明.“中華鱉群體死亡癥病原菌的分離鑒定及其預(yù)防的研究”[D].河北師范大學(xué).碩士論文,2010)等。此外，該菌也能導(dǎo)致小鼠和正常人及免疫功能低下人群感染性并發(fā)癥，引起包括關(guān)節(jié)炎、傷口感染、腸胃炎、菌血癥、腦膜炎和心內(nèi)膜炎等在內(nèi)的多種感染病癥(Lye DJ.“Gastrointestinal colonization rates forhuman clinical isolates of Aeromonas veronii using a mouse model”[J].CurrMicrobiol.2011,63(4):332-336)。

近年來，日益增多的病例表明，維氏氣單胞菌已成為一種重要的人-魚共患致病菌，其分布廣泛，致病性較強，并在食品安全方面占據(jù)舉足輕重的地位，部分國家已經(jīng)將其規(guī)定為食品安全的檢疫對象(吳同壘,單曉楓,孟慶峰,郭偉生,王偉利,錢愛東等.“維氏氣單胞菌研究進展”[J].中國獸藥雜志,2011(07):41-44)。