[發明專利]基于特異性序列的維氏氣單胞菌檢測引物、試劑盒、檢測方法及其開發方法

有效

• 申請號: 201810348638.2
• 申請日: 2018-04-18
• 公開（公告）號: CN108715897B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 王丹;劉柱;唐燕瓊;唐鴻倩;胡新文;馬香
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/6811;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京天馳君泰律師事務所 11592
• 代理人: 孟銳

本發明涉及用于檢測維氏氣單胞菌的引物對，所述引物對的正向引物的核苷酸序列選自SEQ ID NO.1或由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或增加一個或幾個核苷酸后產生的核苷酸序列，所述引物對的反向引物的核苷酸序列選自SEQ ID NO.2或由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或增加一個或幾個核苷酸后產生的核苷酸序列。本發明還涉及包含所述引物對或引物對組合的試劑、試劑盒及其在檢測維氏氣單胞菌中的應用。本發明還涉及開發用于檢測維氏氣單胞菌的引物的方法。

技術領域

本發明涉及一種基于特異性序列的維氏氣單胞菌的檢測引物、包含該引物的試劑、試劑盒、維氏氣單胞菌的檢測方法以及開發維氏氣單胞菌的檢測引物的方法，屬于分子生物學領域。

背景技術

維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)又被稱為維羅納氣單胞菌、維隆氣單胞菌、凡隆氣單胞菌，是一種革蘭氏陰性桿狀細菌，屬無芽孢兼性厭氧型。該菌散在分布，普遍存在于淡水、污水、土壤乃至海水中，兩端鈍圓，大小約為0.3-0.7μm×1.2-2.5μm，具鞭毛，能運動(Kirov SM,Tassell BC,Semmler AB,O'Donovan LA,Rabaan AA等.“Lateral flagellaand swarming motility in Aeromonas species”[J].J Bacteriol.2002,184(2):547-555)。

維氏氣單胞菌屬于強毒病原菌，致病過程主要包括黏附-侵襲-宿主體內定殖以及毒素分泌等過程，期間產生一系列毒力因子，如氣溶素(aerolysin)、腸毒素(enterotoxin)和粘附因子(adherence factor)等，這些毒力因子在水產動物、人類甚至畜禽感染中起著舉足輕重的作用(袁旦一,汪開毓,陳德芳,黃凌遠,王均等.“維氏氣單胞菌在人工感染斑點叉尾鮰體內的組織定位和動態分布研究”[C].中國南方漁業論壇暨第二十九次學術會議論文集.廣西北海,2013)。

該菌侵染宿主范圍十分廣泛。首先，該菌是已知最古老的魚類病原菌之一，感染多種淡水魚類、海水魚類等，給水產養殖魚類以及野生魚類帶來了嚴重威脅(Bossi-KüpferM,Genini A,Peduzzi R,Demarta A.“Tracheobronchitis caused by Aeromonas veroniibiovar sobria after near-drowning”[J].J Med Microbiol.2007,56(Pt 11):1563-1564)。例如，草魚感染維氏氣單胞菌時局部出血、有腹水、脾臟腫大等癥狀(王浩,權可艷,徐麗娟,李夢影,呂利群.“恩諾沙星控制草魚維氏氣單胞菌的用藥方案”[J].淡水漁業,2013,43(2):47-53)。

同時，維氏氣單胞菌還可以感染節肢動物和爬行類動物，如中華絨螯蟹(房海,陳翠珍,張曉君,鞏元芳,葛幕湘.“中華絨螯蟹病原維氏氣單胞菌的檢驗”[J].中國人獸共患病學報.2008,24(1):45-49)、中華鱉(錢明明.“中華鱉群體死亡癥病原菌的分離鑒定及其預防的研究”[D].河北師范大學.碩士論文,2010)等。此外，該菌也能導致小鼠和正常人及免疫功能低下人群感染性并發癥，引起包括關節炎、傷口感染、腸胃炎、菌血癥、腦膜炎和心內膜炎等在內的多種感染病癥(Lye DJ.“Gastrointestinal colonization rates forhuman clinical isolates of Aeromonas veronii using a mouse model”[J].CurrMicrobiol.2011,63(4):332-336)。

近年來，日益增多的病例表明，維氏氣單胞菌已成為一種重要的人-魚共患致病菌，其分布廣泛，致病性較強，并在食品安全方面占據舉足輕重的地位，部分國家已經將其規定為食品安全的檢疫對象(吳同壘,單曉楓,孟慶峰,郭偉生,王偉利,錢愛東等.“維氏氣單胞菌研究進展”[J].中國獸藥雜志,2011(07):41-44)。