[發明專利]ATP、ADP、AMP和PPi濃度聯合探測儀及檢測方法

有效

• 申請號: 201810348304.5
• 申請日: 2018-04-18
• 公開（公告）號: CN108489950B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 舒咬根;羅永濤
• 申請（專利權）人: 易尚明天科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 郭棟梁

1.一種用于同時檢測ATP、ADP、AMP和PPi濃度的聯合探測儀，其特征在于，包括：

激發光源，用于發射激發光；

測試轉盤，所述測試轉盤上設有測試樣品池和對照樣品池，所述測試轉盤通過轉軸連接電機，所述電機能夠帶動所述測試轉盤轉動和定位；

所述測試樣品池包括第一測試樣品池、第二測試樣品池、第三測試樣品池和第四測試樣品池；所述對照樣品池包括第一對照樣品池和第二對照樣品池；

所述測試轉盤上具有多個同心圓；

所述第一測試樣品池和第一對照樣品池的中心點位于同一個同心圓的圓周上；

所述第二測試樣品池、第三測試樣品池、第四測試樣品池和第二對照樣品池的中心點位于另一個同心圓的圓周上；

控制器，通過導線分別連接電機和激發光源，用于控制激發光源發射激發光，用于控制電機的轉軸轉動和定位；

分光片和聚焦鏡，所述分光片設置在所述激發光源的光路上，所述聚焦鏡設置在所述分光片的分光光路上，所述分光片用于將所述激發光源發射的光分光到所述聚焦鏡上，所述聚焦鏡用于對經過所述分光片的光進行聚焦，聚焦后的光照射到測試樣品池或對照樣品池；

第一光電倍增管，通過導線連接所述控制器，用于采集第一測試樣品池和第一對照樣品池中的樣品受激后的發射光；將所述發射光轉換成電信號并發送給所述控制器的數據處理系統；

第二光電倍增管，通過導線連接所述控制器，用于采集第二測試樣品池、第三測試樣品池、第四測試樣品池和第二對照樣品池中的自發化學熒光，將所述化學熒光轉換成電信號并發送給所述控制器的數據處理系統；

所述控制器的數據處理系統根據接收的電信號分析測試樣品或對照樣品中目標物的檢測濃度；

其中，第一對照樣品池注入：5’-核苷酸酶5’-NT、腺苷脫氨酶ADA、嘌呤核苷磷酸化酶PNP、黃嘌呤氧化酶XO、10-乙酰基-3,7-二羥基吩嗪ADHP、辣根過氧化物酶HRP和緩沖液BBS；

第一測試樣品池注入：5’-NT、ADA、PNP、XO、ADHP、HRP和樣品單磷酸腺苷AMP；

第一測試樣品池發生如下反應：

其中：Ade為腺苷，Ino為肌苷，Hyp為次黃嘌呤，Resorufin為試鹵靈；k₊表示AMP與5’-NT的結合速率；k_-表示AMP與5’-NT的解離速率；k_cat表示5’-NT對AMP的催化速率；V_Ade、V_Ino、V_Hyp和V_H2O2則依次表示從Ade開始到生成Resorufin的級聯反應中每個中間產物的生成速率；

終端產物試鹵靈Resorufin的最終濃度就是樣品中底物AMP的初始濃度；

其中，第二對照樣品池注入：熒光素luciferin /熒光素酶luciferase和緩沖液BBS；

第二測試樣品池注入：熒光素luciferin /熒光素酶luciferase和樣品三磷酸腺苷ATP；

化學熒光強度直接表征樣品中的ATP濃度；

其中，第三測試樣品池注入：luciferin/luciferase、尿苷三磷酸UTP、核苷二磷酸激酶NDPK和樣品二磷酸腺苷ADP；

第三測試樣品池則發生如下反應：

其中：UDP表示葡萄糖焦磷酸化酶；

測得的ATP濃度直接反映了樣品中ADP的濃度；

其中，第四測試樣品池注入：luciferin/luciferase、過硫酸銨APS、ATP 硫酸化酶sulfurylase和樣品焦磷酸PPi；

第四測試樣品池則發生如下反應：

測得的ATP濃度直接反映了樣品中PPi的濃度；

所述第一光電倍增管用于接收第一對照樣品池和第一測試樣品池的發射光，將所述發射光轉換成電信號并發送給所述控制器的數據處理系統；

所述第二光電倍增管用于接收第二對照樣品池、第二測試樣品池、第三測試樣品池和第四測試樣品池的自發化學熒光，將所述自發化學熒光轉換成電信號并發送給所述控制器的數據處理系統；

控制器的數據處理系統根據測得的穩態時熒光強度差，再通過標準曲線分別換算成AMP、ATP、ADP和PPi濃度。