[發明專利]環狀RNA circ-ERBB2及其檢測試劑與應用

有效

• 申請號: 201810347924.7
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108624589B
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 張茂雷;賴炳權;羅景燕;吳潔;趙發蘭
• 申請（專利權）人: 廣州永諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/6886
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;周全英

本發明涉及一種環狀RNA circ?ERBB2及其檢測試劑與應用，屬于生物技術領域。本發明的環狀RNA circ?ERBB2對應的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示，所述環狀RNA circ?ERBB2由ERBB2母基因的第3,4,5,6和7外顯子反向拼接環化產生；本發明環狀RNA circ?ERBB2的檢測引物如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；本發明環狀RNA circ?ERBB2的檢測探針如SEQ ID NO:4所示，所述探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團。本發明提供了一種新的環狀RNA分子—環狀RNA circ?ERBB2，并以該環狀RNA circ?ERBB2作為分子標志物診斷乳腺癌；本發明還設計針對環狀RNA circ?ERBB2分子的熒光定量檢測引物及taqman探針，通過該探針和引物申請人在多個乳腺癌細胞及正常乳腺細胞中檢測到了circ?ERBB2分子的表達情況。

技術領域

本發明涉及一種環狀RNA circ-ERBB2及其檢測試劑與應用，具體涉及一種環狀RNA circ-ERBB2、其檢測引物和探針以及該環狀RNA circ-ERBB2在乳腺癌診斷中的應用，屬于生物技術領域。

背景技術

環狀RNA(circRNA)是一類在生物體內存在的閉合的環狀RNA分子，具有多種生物學特性，而且是客觀大量存在的。環狀RNA由基因組DNA轉錄加工后，反向拼接產生的一類新穎的核酸分子。對于環化RNA的具體功能機制尚未明確，但在生物體內可以多層次調控基因的表達，比如：環狀RNA可以通過海綿作用吸附miRNA，轉錄后調控基因表達；環狀RNA可以和RNA結合蛋白作用調控基因轉錄；環狀RNA可以和基因組DNA結合調控RNA的剪接；另外環狀RNA可以直接作為模板翻譯蛋白質發揮重要的生物學作用。

ERBB2基因又叫HER2基因，是一個著名的癌基因，在多種腫瘤細胞及臨床病理組織中呈現高表達。人類的ERBB2基因定位于17號染色體長臂上，整個轉錄本基因組跨越28685bp堿基對，全長轉錄本包含31個外顯子。

然而，現有技術暫無關于環狀RNA circ-ERBB2的研究。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處而提供一種環狀RNA circ-ERBB2及其檢測試劑與應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

第一方面，本發明提供了一種環狀RNA circ-ERBB2，所述環狀RNA circ-ERBB2對應的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示，所述環狀RNA circ-ERBB2由ERBB2母基因的第3,4,5,6和7外顯子反向拼接環化產生。

本發明的環狀RNA circ-ERBB2是申請人檢測環狀RNA數據庫circbase及設計反向擴增PCR引物，經過大量研究，在乳腺癌細胞系BT474細胞中識別鑒定的一個新型環狀RNA分子。環狀RNA circ-ERBB2是由ERBB2基因的第3和7外顯子首位相接連接而成的環狀RNA分子，申請人將其命名為circ-ERBB2，成熟circ-ERBB2序列的長度為676nt。

第二方面，本發明提供了上述環狀RNA circ-ERBB2作為分子標志物在制備用于診斷乳腺癌的試劑盒中的應用。

經過研究，申請人發現，本發明的環狀RNA circ-ERBB2分子在乳腺癌細胞高表達，由此本發明的環狀RNA circ-ERBB2可作為分子標志物用于診斷乳腺癌。并且，本發明環狀RNA circ-ERBB2具有閉合的環狀結構，不容易受核酸外切酶攻擊，在生物體內非常穩定，是理想的分子診斷標志物。

第三方面，本發明提供了上述環狀RNA circ-ERBB2的檢測試劑在制備用于診斷乳腺癌的試劑盒中的應用。