[發明專利]整體凝膠復合材料制備及用于高效分離人血清中蛋白質和小分子物質

有效

• 申請號: 201810345286.5
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108395567B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 張海霞;趙淑玲
• 申請（專利權）人: 蘭州大學;蘭州大學中衛高新技術研究院
• 主分類號: C08J9/40
• 分類號: C08J9/40;C08J9/42;C08J9/36;C08L33/14;C08F220/20;C08F226/02;B01J20/26;B01J20/291;B01J20/30
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 馬正良

1.一種整體凝膠復合材料的制備方法，其步驟是：

以2.0 mL的離心管為模具，以水為溶劑，以2-羥基乙基甲基丙烯酸酯為基本單體，以有季銨基的二烯丙基二甲基氯化銨為交聯劑，單體和交聯劑兩者質量之和占總質量的8%，單體和交聯劑摩爾比為3:1，將溶劑、單體和交聯劑混合均勻，氮氣鼓泡除氧10 分鐘，用移液槍均勻移取0.3 mL混合液于模具中，再分別加入10 μL體積比為10 %四甲基乙二胺和10 μL質量分數比為5 %過硫酸銨水溶液，隨后在零下20℃的冰箱中進行自由基聚合反應24 h；反應完畢，混合溶液變成含有季銨基的整體凝膠材料，室溫下解凍，凝膠內部的冰晶融化成水，凝膠形成三維互通的大孔，二次水清洗，制備出整體凝膠Ⅰ；然后，將整體凝膠Ⅰ依次分別放入0.5 mg/mL含有羧基的氧化石墨烯GO和質量分數為2.5%含有胺基的聚乙烯亞胺b-PEI水溶液中自組裝，對整體凝膠Ⅰ的大孔表面修飾，超聲30min后用二次水洗去未組裝的GO或b-PEI，重復自組裝兩次，制備出整體凝膠復合材料Ⅱ；最后，整體凝膠復合材料Ⅱ置于1MNaOH水溶液中，利用整體凝膠復合材料Ⅱ上的胺基與0.8 M 2-溴-N,N-二乙基乙胺氫溴酸鹽DE-Br在60℃下反應30 min，反應結束，材料用10 mM pH7.4磷酸緩沖溶液和二次水清洗，制備出整體凝膠復合材料pDC/GO-DE。

2.由權利要求1所述一種整體凝膠復合材料的制備方法制備的整體凝膠復合材料在高效分離人血清中蛋白質和小分子物質中的應用，其步驟是：

在注射器的底部放置一塊篩板，防止萃取過程中凝膠移動，將凝膠pDC/GO-DE作為萃取吸附劑裝入注射器中，填裝好的注射器安裝在固相萃取真空裝置上；0.1mL已解凍人血清，0.1mL 2 μg/mL標準小分子物質溶液，0.8mL 10mM pH7.4 PBS溶液，三者混合均勻，制備出1.0 mL 200 ng/mL加標人血清樣品；0.1mL已解凍人血清，0.9mL 10mM pH 7.4 PBS溶液，兩者混合均勻，制備出空白人血清樣品；將制備好的樣品上載到上述注射器中進行動態萃取分離，時間為10min，流出液用考馬斯亮藍顯色，并用紫外光譜儀在595 nm處檢測血清中蛋白的萃取率；對于加標樣品，回收的小分子溶液用氮吹濃縮后用于LC-MS檢測分析并計算小分子回收率。