[發明專利]一種檢測曼氏迭宮絳蟲的引物組、試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201810345262.X
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108342490A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 劉偉;高帥鵬;靳元春;柳亦松;李昌恒;譚磊
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 長沙朕揚知識產權代理事務所(普通合伙) 43213
• 代理人: 周孝湖

本發明公開了一種檢測曼氏迭宮絳蟲的引物組、試劑盒及其使用方法，其中，引物組包括：外引物cox1?F3：TTTACTGTGGGGTTGGAC；外引物cox1?B3：CAAGCAGAAAGAATTATACCAGT；內引物cox1?FIP：ACCTTTATACCCGTGGGAACCGAATTCAGACTGCTGTTTTCTTTAGTTCT；內引物cox1?BIP：AATAGTCGTGTTTCGTTGCGTGAATTCCACCCATAGTAAACAACACAAT；上述引物對應的目的基因為曼氏迭宮絳蟲DNA中的cox1基因片段。該引物組、試劑盒及其使用方法靈敏度高、特異性高、操作簡單便捷。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種檢測曼氏迭宮絳蟲的引物組、試劑盒及其使用方法。

背景技術

曼氏迭宮絳蟲病是一種人畜共患寄生蟲病，呈全球性分布，以東南亞地區報道甚多，在我國各省也均有報道。曼氏迭宮絳蟲形態特征與其它迭宮絳蟲相似，肉眼和顯微鏡檢測對操作者的經驗要求較高，且存在較強的主觀性。而中絳期幼蟲的寄生部位多變，臨床表現不一，病原學檢查和臨床診斷均存在很大的局限性，目前主要通過活檢或手術中查見病原體得以確診，尚未見切實可行的術前診斷工具，誤診、漏診率極高。

目前常用的血清免疫學檢測方法，如微量ELISA、化學發光ELISA、檢測血清曼氏裂頭蚴特異性抗體具有敏感性高、特異性強、創傷性小等優點，但操作技術條件要求高，不適合在基層推廣應用。金標滲濾法檢測曼氏迭宮絳蟲雖然簡易、快速而且檢出率高，但與肺吸蟲病、囊蟲存在較高的交叉反應，還需進行額外的鑒別診斷。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種檢測曼氏迭宮絳蟲的引物組、試劑盒及其使用方法，以解決現有技術中檢測曼氏迭宮絳蟲的方法技術條件要求高，方法費時，以及存在交叉反應、主觀性強的問題。

為了實現上述目的，根據本發明的一個方面，提供了一種檢測曼氏迭宮絳蟲的引物組，至少包括以下四條引物：外引物cox1-F3，其核苷酸序列為：TTTACTGTGGGGTTGGAC；外引物cox1-B3，其核苷酸序列為：CAAGCAGAAAGAATTATACCAGT；內引物cox1-FIP，其核苷酸序列為：ACCTTTATACCCGTGGGAACCGAATTCAGACTGCTGTTTTCTTTAGTTCT；內引物cox1-BIP，其核苷酸序列為：AATAGTCGTGTTTCGTTGCGTGAATTCCACCCATAGTAAACAACACAAT；上述引物對應的目的基因為曼氏迭宮絳蟲DNA中的cox1基因片段。

根據本發明的另一方面，提供了一種檢測曼氏迭宮絳蟲的試劑盒，試劑盒包括：10×ThermoPol Buffer、MgSO₄溶液、dNTP溶液、Bst DNA聚合酶、外引物cox1-F3溶液、外引物cox1-B3溶液、內引物cox1-FIP溶液、內引物cox1-BIP溶液以及ddH₂O；外引物cox1-F3的核苷酸序列為：TTTACTGTGGGGTTGGAC；外引物cox1-B3的核苷酸序列為：CAAGCAGAAAGAATTATACCAGT；內引物cox1-FIP的核苷酸序列為：ACCTTTATACCCGTGGGAACCGAATTCAGACTGCTGTTTTCTTTAGTTCT；內引物cox1-BIP的核苷酸序列為：AATAGTCGTGTTTCGTTGCGTGAATTCCACCCATAGTAAACAACACAAT。

進一步地，MgSO₄溶液的濃度為100mM，dNTP溶液為10mM each，外引物cox1-F3溶液的濃度為5μM，外引物cox1-B3溶液的濃度為5μM，內引物cox1-FIP溶液的濃度為40μM，內引物cox1-BIP溶液的濃度為40μM。