[發(fā)明專利]一種用于培養(yǎng)擴增牙髓干細胞的血清/血漿替代物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810344787.1
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108517313B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭子寬;朱笑飛
• 申請（專利權(quán)）人: 郭子寬;福建省海西細胞生物工程有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊;饒文君

本發(fā)明公開了一種用于人牙髓干細胞培養(yǎng)擴增的血清/血漿/血小板替代物，所述替代物包括：（1）5?羥色胺類物質(zhì)；（2）玻連蛋白；（3）前列腺素類物質(zhì)；（4）檸檬酸或檸檬酸鹽。使用該替代物培養(yǎng)牙髓干細胞，避免了因培養(yǎng)體系批次間差異，造成所培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞性質(zhì)不同的可能性。此外，使用該體系培養(yǎng)牙髓干細胞，在細胞治療過程中將避免因動物血清或血漿引起的人畜共患病，以及因細胞治療引起的人體免疫反應(yīng)的風(fēng)險。本發(fā)明的血清/血漿/血小板替代物，不僅適用于人牙髓干細胞培養(yǎng)擴增，也適于其它組織來源間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)，應(yīng)用前景廣闊。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細胞生物學(xué)領(lǐng)域細胞增殖范疇，具體一種用于人牙髓干細胞培養(yǎng)擴增的血清/血漿/血小板替代物，培養(yǎng)包括牙髓干細胞在內(nèi)的人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)時，使用的一種胎牛血清/血漿、或人血清/血漿以及富血小板的人血漿替代物，從而達到快速培養(yǎng)擴增人間充質(zhì)干細胞尤其是牙髓干細胞的目的。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells, MSC）是一種成體干細胞，具有成骨、成脂肪和呈軟骨能力。除多向分化能力外，體外培養(yǎng)的MSC尚具有以下功能：（1）基于促血管新生機制的組織修復(fù)能力；（2）基于旁分泌機制的免疫調(diào)節(jié)作用；（3）基于旁分泌及細胞間接觸機制的造血支持作用。因此，MSC不但適用于骨和軟骨的修復(fù)，可用于植物抗宿主病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫相關(guān)疾病的治療，以及處理因糖尿病及冠心病引起的微小血管阻塞。鑒于此，在美國NIH注冊的有關(guān)MSC的臨床試驗已經(jīng)近800項。在加拿大、新西蘭、韓國、日本等國家，政府已經(jīng)批準MSC作為一個藥物，用于移植物抗宿主病、潰瘍性結(jié)腸炎、骨關(guān)節(jié)炎、心肌梗塞等疾病的治療。國內(nèi)也有研究者將MSC或牙髓干細胞以藥物的形式，申報國家食品與藥物監(jiān)督管理局，開展相關(guān)的臨床試驗，有些申請已經(jīng)獲得批準。因此，作為一種細胞藥物，MSC包括牙髓干細胞具有廣闊的應(yīng)用前景。

研究發(fā)現(xiàn)，多種組織或器官中存在MSC，如骨髓、脂肪、臍帶、胎盤、牙髓、肌肉、肝臟、心臟等。目前，常用的組織來源包括骨髓、脂肪、臍帶、胎盤及牙髓。這些不同組織來源的MSC，常有不同的名稱，如脂肪干細胞、胎盤干細胞及牙髓干細胞等，其實，都應(yīng)屬于間充質(zhì)干細胞的范疇。與脂肪、骨髓、臍帶和胎盤等組織不同，一枚牙齒中牙髓含量極少，所含MSC數(shù)量極低。另外，我國FDA發(fā)布的細胞產(chǎn)品質(zhì)量指導(dǎo)原則中，建議盡量不使用異種血清（常指胎牛血清）擴增細胞。因此，將牙髓干細胞應(yīng)用于臨床，尤其是以藥物形式用于臨床，首先要解決的是培養(yǎng)擴增的問題。培養(yǎng)擴增牙髓干細胞必然面對兩個難題：（1）培養(yǎng)擴增時宜選用無血清培養(yǎng)基；（2）使用這種培養(yǎng)基在大量擴增牙髓干細胞的同時，要維系細胞的“干性”（stemness）。

為避免異種血清引起的人畜共患病及免疫反應(yīng)等問題，有人提出使用濃縮人血小板替代牛血清，用于牙髓干細胞的培養(yǎng)，并獲得了滿意的效果，獲得的干細胞數(shù)量是使用相同濃度胎牛血清培養(yǎng)所獲得細胞數(shù)量的2倍（Govindasamy V, et al. Human plateletlysate permits scale-up of dental pulp stromal cells for clinicalapplications. Cytotherapy, 2011; 13:1221-33）。然而，濃縮血小板是一種血液制品，在沒有滅活病毒的情況下，仍然有傳播傳染病的風(fēng)險；而常規(guī)的滅活程序，如白蛋白制備程序，60℃孵育12小時，常使多種細胞因子失活，使?jié)饪s血小板喪失了支持細胞增殖的能力。另外，血小板個體來源不同，其作用能否保證穩(wěn)定，亦即，能否保障所獲得MSC的批次間穩(wěn)定性等，也是必須考慮的問題。因此，利用一種化學(xué)成分清楚、無血清成分的培養(yǎng)基培養(yǎng)擴增牙髓MSC，對治療的安全性和有效性，都是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明之目的在于提供一種胎牛血清/血漿、或人血清/血漿以及富血小板的人血漿替代物，從而配制一種或幾種無血清、化學(xué)成分清晰的培養(yǎng)基，適用于培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞，尤其是牙髓來源的間充質(zhì)干細胞。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的方案如下。