[發明專利]一株甲基營養型芽孢桿菌及其在防治白蠟褐斑病中的應用

有效

• 申請號: 201810343861.8
• 申請日: 2018-04-17
• 公開（公告）號: CN108315282B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 劉德璽;楊慶山;劉貴民;張淑靜;劉盛芳;劉幸紅;牛贍光
• 申請（專利權）人: 山東省林業科學研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 37105 濟南誠智商標專利事務所有限公司
• 代理人: 韓百翠

本發明公開了一株甲基營養型芽孢桿菌及其在防治白蠟褐斑病中的應用。該菌株是從煙臺市萊州灣海泥中分離獲得的，已于2017年9月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14675。由該甲基營養型芽孢桿菌制備的生物防治制劑，不僅能夠高效的防治白蠟褐斑病害(最后一次施藥后14d其防治效果達到75％以上)，還能促進白蠟生長，可以作為生物農藥或生物肥料，防治白蠟褐斑病。

技術領域

本發明屬于植物病害生物防治技術領域。具體而言，本發明涉及一株甲基營養型芽孢桿菌及其在防治白蠟褐斑病中的應用，以及采用該甲基營養型芽孢桿菌制備的生物防治制劑。

背景技術

白蠟因其具有較強的適應能力，且生長快、抗性強、材質好、經濟價值高，并具有耐干旱、耐鹽堿、耐瘠薄等特點，而成為我國沿海濕地用材林、防護林、風景林等造林的優良樹種。近年來，隨著城市綠化廣泛推廣使用，地區間樹種苗木的調運，環境條件的惡化等諸多因素造成白蠟樹病害的增多，其中白蠟褐斑病(Cercospora fraxinites Ell.et Ev.)是白蠟常見病害之一。白蠟褐斑病由梣假尾孢菌(Cercospora fraxinites Ell.et Ev.)引起，危害白蠟葉片，6～7月爆發。白蠟褐斑病的發生可使白蠟在早期出現落葉現象，導致白蠟樹的生長量下降，嚴重影響著園林綠化美化效果。

目前生產上常采用化學藥劑防治白蠟褐斑病。化學防治極易造成農藥殘留，污染環境，并且化學農藥的長期使用，使得病原菌產生抗藥性，導致防治效果下降甚至失敗。生物防治，對人畜安全、環境兼容性好且病原菌不易產生抗藥性，具有化學殺菌劑不具有的優勢，正逐步成為代替化學殺菌劑的最佳方式。而獲得高效拮抗菌是生物防治的基礎。

甲基營養型芽孢桿菌是一類嗜溫、好氧、產芽孢的桿狀細菌，該菌廣泛存在于自然界及植物根莖等內部器官中，安全無毒，且具有廣譜的抗菌活性和極強的抗逆能力。近年來，國內學者對甲基營養型芽孢桿菌在植物生防、促生等方面應用研究較多。已有研究指出，該菌對水稻青枯病、香蕉枯萎病等具有較強的抑制作用，并能促進作物生長。可見，甲基營養型芽孢桿菌在防治病害發生和促進作物生長等方面顯示出廣闊的應用前景。也正因如此，甲基營養型芽孢桿菌被越來越多的企業看中，作為生產生物菌劑的功能菌所用。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于高效防治白蠟褐斑病的新的微生物——甲基營養型芽孢桿菌菌株TJ2。本發明的甲基營養型芽孢桿菌菌株具有生長速度快、產量大、抗逆性強，在植物(尤其是白蠟)表面能夠快速大量定殖等特點，因此具有良好的應用前景。

本發明的上述目的是通過以下技術方案實現的：本發明所提供的菌株為甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)菌株TJ2，是從煙臺市萊州灣海泥中分離獲得的，已于2017年9月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所)，保藏編號為CGMCC No.14675。其具有以下生物學特性：在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基或LB(Luria-Bertani)培養基上該菌株形狀為桿狀，鞭毛特征明顯，單菌落為圓形，污白色、不透明、中央隆起、邊緣整齊，后期有褶皺；在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基上，28℃下培養兩天后，鏡檢，菌體細胞呈桿狀，能運動。經革蘭氏染色呈陽性(以大腸桿菌為對照)。經芽孢染色后觀察芽孢呈橢圓形或柱狀。

本發明甲基營養型芽孢桿菌(B.methylotrophicus)菌株TJ2的培養方法或繁殖方法包括：

(1)普通培養保存采用LB培養基，配方為：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂15～20g，蒸餾水1000mL，pH調至7.0～7.2。

(2)實驗室液體培養采用LB液體培養基，配方為：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，蒸餾水1000mL，pH調至7.0～7.2。