[發(fā)明專利]基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法及復(fù)合編碼探針在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810343607.8 | 申請日： | 2018-04-17 |
| 公開（公告）號： | CN108531566A | 公開（公告）日： | 2018-09-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 戴麗麗;劉旭宏;王小波;陳月琴 | 申請（專利權(quán)）人： | 廈門基科生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 361006 福建省廈門市自*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 探針 復(fù)合編碼 堿基序列 修飾基團(tuán) 探針雜交 環(huán)狀區(qū) 末端區(qū) 配對 靶標(biāo)基因 淬滅基團(tuán) 多重檢測 發(fā)卡結(jié)構(gòu) 核酸序列 互補序列 實時檢測 熒光基團(tuán) 熒光通道 反義鏈 可檢測 正義鏈 靶點 檢測 配合 | ||
1.基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
a.根據(jù)待測靶標(biāo)基因的特異性序列合成復(fù)合編碼探針；
所述復(fù)合編碼探針為由第一子探針和第二子探針部分配對所形成的一雙發(fā)卡結(jié)構(gòu)的核酸序列，其包含：loop環(huán)狀區(qū)、莖末端區(qū)和修飾基團(tuán)區(qū)；
所述第一子探針和第二子探針上位于莖末端區(qū)的堿基序列相互配對，所述第一子探針和第二子探針上位于loop環(huán)狀區(qū)的堿基序列分別與待測靶標(biāo)基因的正義鏈和反義鏈的不同區(qū)域的堿基序列構(gòu)成互補序列；
所述修飾基團(tuán)區(qū)的數(shù)量為二，該修飾基團(tuán)區(qū)包括相配合的熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)；
b.根據(jù)待測靶標(biāo)基因的特異性序列合成上游引物和下游引物；
c.采用上述獲得的探針和引物構(gòu)建反應(yīng)體系，對待測靶標(biāo)基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
d.在PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，收集PCR產(chǎn)物的熒光信號以形成相應(yīng)的擴(kuò)增曲線，對待測靶標(biāo)基因進(jìn)行分析。
2.如權(quán)利要求1所述的基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于：
所述莖末端區(qū)的數(shù)量為二，所述loop環(huán)狀區(qū)的兩端分別連接所述兩個莖末端區(qū)，該兩個莖末端區(qū)的另一端分別連接所述兩個修飾基團(tuán)區(qū)，使得兩個修飾基團(tuán)區(qū)位于復(fù)合編碼探針的兩端。
3.如權(quán)利要求2所述的基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于：
所述兩個修飾基團(tuán)分別為第一修飾基團(tuán)和第二修飾基團(tuán)；
第一修飾基團(tuán)和第二修飾基團(tuán)的所包含的兩個熒光基團(tuán)分別位于同一子探針上的5'端和3'端。
4.如權(quán)利要求2所述的基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于：
所述兩個修飾基團(tuán)分別為第一修飾基團(tuán)和第二修飾基團(tuán)；
第一修飾基團(tuán)和第二修飾基團(tuán)的所包含的兩個熒光基團(tuán)分別位于不同的子探針上的5'端或3'端。
5.如權(quán)利要求3或4中任一項所述的基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于：
所述第一熒光基團(tuán)和第二熒光基團(tuán)分別采用以下所述基團(tuán)中的一種，其包括但不限于：ALEXA350、FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Texas Red、Cy5、Cy5.5、TAMRA；
所述第一淬滅基團(tuán)和第二淬滅基團(tuán)分別采用以下所述基團(tuán)中的一種，其包括但不限于：Dabcyl、BHQ-1、BHQ-2、QYS-7。
6.如權(quán)利要求2所述的基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于：
所述第一子探針和第二子探針為可用于FQ-PCR的熒光探針，可采用以下探針中的一種，其包括但不限于：水解探針、MGB探針、分子信標(biāo)探針、置換探針、蝎子引物、Amplifier引物。
7.如權(quán)利要求2所述的基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于：
所述loop環(huán)狀區(qū)的長度為包括15-40個堿基對；所述莖末端區(qū)的長度為包括6-20個堿基對。
8.如權(quán)利要求2所述的基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于：
第一子探針和第二子探針上位于所述的莖末端區(qū)的堿基序列與待測靶標(biāo)基因的特異性序列不相關(guān)。
9.如權(quán)利要求2所述的基于復(fù)合編碼探針雜交的DNA檢測方法，其特征在于：
所述步驟c中的PCR擴(kuò)增，其變性溫度為95℃、退火溫度為60℃、延伸溫度為72℃。
10.一種復(fù)合編碼探針，適用于基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的DNA檢測方法，其特征在于：所述復(fù)合編碼探針是上述權(quán)利要求1-8中任一項所述的復(fù)合編碼探針。
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